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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 提RNA反转成cDNA,RT-PCR一直P不出来目的条带怎么办已有3人参与

各位大神求助,我最近一直在做PT-PCR,一直没有目的条带,或者只有一点点很淡。我跑了我提的RNA条带很亮,有三条。没问题。但为什么P不出来,是反转出了问题么?可是我反转了两次都这样啊!分子小白求大神指点

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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把CDNA跑个电泳,发图来看下。,或用其他引物P下CDNA.
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2017-03-10 11:03:46
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6_pengfei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用你的引物扩增DNA试试,说不定是引物没设好,如果DNA扩增条带亮,那就是你的cDNA有问题,估计是反转录出问题了
努力精修
3楼2017-03-10 13:01:58
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试,说不定是引物没设好,如果DNA扩增条带亮,那就是你的cDNA有问题,估计是反转录出问题了

这个是正解control

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-03-10 13:16:59
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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试,说不定是引物没设好,如果DNA扩增条带亮,那就是你的cDNA有问题,估计是反转录出问题了

我用另一对引物也试过,还是P不出来

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5楼2017-03-11 14:14:23
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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试,说不定是引物没设好,如果DNA扩增条带亮,那就是你的cDNA有问题,估计是反转录出问题了

谢谢

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6楼2017-03-11 14:15:16
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MaxInTheWind

新虫 (小有名气)

cDNA引物P DNA不能做control啊,引物要跨外显子的,P DNA出不来才对

LZ的GAPDH呢?或者其他housekeeping gene control结果怎么样
7楼2017-03-12 15:16:21
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火鸡花

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-10 11:03:46
把CDNA跑个电泳,发图来看下。,或用其他引物P下CDNA.

cDNA直接跑电泳是什么条带

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8楼2019-07-28 14:09:28
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