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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提RNA反转成cDNA，RT-PCR一直P不出来目的条带怎么办
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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 提RNA反转成cDNA，RT-PCR一直P不出来目的条带怎么办 已有3人参与

各位大神求助，我最近一直在做PT-PCR，一直没有目的条带，或者只有一点点很淡。我跑了我提的RNA条带很亮，有三条。没问题。但为什么P不出来，是反转出了问题么？可是我反转了两次都这样啊！分子小白求大神指点

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1楼 2017-03-10 10:50:51
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把CDNA跑个电泳，发图来看下。，或用其他引物P下CDNA.
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2017-03-10 11:03:46
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6_pengfei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用你的引物扩增DNA试试，说不定是引物没设好，如果DNA扩增条带亮，那就是你的cDNA有问题，估计是反转录出问题了
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努力精修
3楼2017-03-10 13:01:58
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试，说不定是引物没设好，如果DNA扩增条带亮，那就是你的cDNA有问题，估计是反转录出问题了

这个是正解control

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-03-10 13:16:59
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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试，说不定是引物没设好，如果DNA扩增条带亮，那就是你的cDNA有问题，估计是反转录出问题了

我用另一对引物也试过，还是P不出来

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5楼2017-03-11 14:14:23
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生工小懒虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-03-10 13:01:58
你用你的引物扩增DNA试试，说不定是引物没设好，如果DNA扩增条带亮，那就是你的cDNA有问题，估计是反转录出问题了

谢谢

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6楼2017-03-11 14:15:16
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MaxInTheWind

新虫 (小有名气)
cDNA引物P DNA不能做control啊，引物要跨外显子的，P DNA出不来才对

LZ的GAPDH呢？或者其他housekeeping gene control结果怎么样
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7楼2017-03-12 15:16:21
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火鸡花

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-10 11:03:46
把CDNA跑个电泳，发图来看下。，或用其他引物P下CDNA.

cDNA直接跑电泳是什么条带

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8楼2019-07-28 14:09:28
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