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stantontang

金虫 (小有名气)

[求助] 关于多糖凝胶色谱分离问题 已有2人参与

一种提取多糖,我用了GPC测量,用的是Ultrahydrogel柱子,有三个峰出现。
http://muchongimg.xmcimg.com/dat ... _1488936957_216.png
但是我用了Superdex 75 prep grade (10×600mm)分离制备时,只出现两个峰,而且非常靠近无法制备分离出。用的就是水做流动相。

分子量大约在8000Da和30000Da附近

如何能把这些组分全分离,虫友支个招

关于多糖凝胶色谱分离问题
8.png
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很简单,色谱柱不合适,换能分开的柱子

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2楼2017-03-08 14:01:24
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stantontang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-08 14:01:24
很简单,色谱柱不合适,换能分开的柱子

我明白,只是实验室没怎么多柱子,我不能每个都买来试,我就是想做过此类实验的,有经验的根据这些信息,推荐哪些更适合分。
3楼2017-03-08 19:03:11
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那至少得确定它是三个峰还是两个峰吧,检测时流动相,流速都会影响
4楼2017-03-08 20:17:44
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by stantontang at 2017-03-08 19:03:11
我明白,只是实验室没怎么多柱子,我不能每个都买来试,我就是想做过此类实验的,有经验的根据这些信息,推荐哪些更适合分。...

对于专门做GPC的人来说,你的信息给的太少了,具体什么样品?什么色谱柱型号?什么温度?什么流速?最简单的法子,找专业的地方外送测一下,让内行帮你确定条件

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5楼2017-03-08 21:10:13
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ancient1997

新虫 (初入文坛)

柱色谱应该能用,就是需要考虑一下这两个物质的其他方面的差异,改一下柱子里面的东西。或者纸层析什么的

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6楼2017-03-14 08:55:46
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496824170

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-08 21:10:13
对于专门做GPC的人来说,你的信息给的太少了,具体什么样品?什么色谱柱型号?什么温度?什么流速?最简单的法子,找专业的地方外送测一下,让内行帮你确定条件
...

您好,请问一下,现在我GPC测多糖分子量,之前测得分离出四个峰,分子量是几万左右(实验数据全丢失),现在我的条件是0.1M/L硝酸钠,温度35,流速0.8,色谱柱型号是Ultrahydrogel 120,Ultrahydrogel 250,Ultrahydrogel 500,三个色谱柱串联,标曲定量后分子量只有几千。这是什么问题啊
7楼2017-07-14 16:39:38
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 496824170 at 2017-07-14 16:39:38
您好,请问一下,现在我GPC测多糖分子量,之前测得分离出四个峰,分子量是几万左右(实验数据全丢失),现在我的条件是0.1M/L硝酸钠,温度35,流速0.8,色谱柱型号是Ultrahydrogel 120,Ultrahydrogel 250,Ultrah ...

因为你测的是相对分子量,结果与流动相,色谱柱型号,流速温度标准品都有关系,除非一模一样的配置,否则测不出一致的结果。建议你测绝对分子量

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8楼2017-07-14 16:44:35
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