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完美理想国

银虫 (正式写手)

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[交流] 凝胶柱分离多糖

向各位请教关于用凝胶柱（G或DEAE）分离植物多糖的几个问题：
1. 文献上许多用凝胶柱分离时常用梯度的NaCl作流动相，这种流动相得作用是什么？这种流动相是与G系列还是DEAE型还是两者皆可？
2. G系列分离的分子量一般有一定范围，比如1000-10000，那么小于，大于和在范围中的三种类型的物质他们色谱行为是怎样的？是大于的很快呈尖峰下来，小于的和范围之中的物质混合下来吗？那为什么会有这个适用的范围下限呢？
3. 流份用紫外检测作图有单峰出现的流份就可以看做是单一的多糖了吗？
谢谢大家！

[ Last edited by 完美理想国 on 2011-4-18 at 22:25 ]

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1楼 2011-04-18 21:43:17

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langshi1712

木虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
完美理想国(金币+3): 谢谢交流！ 2011-04-24 10:16:19

咋俩做的还挺像的，我说说我的看法吧，在用凝胶色谱的时候，由于凝胶分子里还有微量的羧基，因此会有一定的离子交换作用，用Nacl做洗脱液，是因为在一定的离子强度下，这种离子交换作用就很微弱了，可以使样品按照分子量的大小依次流出。用DEAE的时候，由于是离子交换色谱，靠的就是在不同的离子强度情况下，多糖与功能基团的结合情况不同来分离样品的。至于分子量，如果样品的分子量太大，那么凝胶柱对样品就是全排阻，比如，G-100的分离范围时4000-100000，多糖分子就都不会进入凝胶颗粒里面，直接由外面流出了比如，G-100的分离范围时4000-100000，那么，20万和三十万的多糖，由于都不能进到凝胶颗粒里面，就都会从颗粒间隙流出，那么他们流出所花的时间久事一样的，不能被分离。做出单峰，也不能认为是纯品，只能说在这种分离情况下他们不能被分离，还要做其他的实验