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ruoxinhappy

新虫 (小有名气)

[求助] 求助各位大神帮我看下琼脂糖凝胶电泳图,谢谢!已有1人参与

大家好,下面是我质粒提取后的琼脂糖凝胶电泳图,前面的6个条带是我们用自己的试剂提取的质粒,后面两个是试剂盒提取的质粒,我想问下前面的质粒是什么原因导致的?某个试剂出错了?谢谢

求助各位大神帮我看下琼脂糖凝胶电泳图,谢谢!
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ruoxinhappy: 金币+15, 我将几个样品单酶切了下,前面的几个在目的大小处有很浅的条带,试剂盒的正常。后面我又测试了下看是否溶液的问题,结果排除了这个原因,不知道到底是什么情况 2017-03-08 09:47:42
质粒在琼脂糖凝胶电泳中存在三条电泳条带,按照Marker的位置从大到小依次为:线性DNA,松散的环状DNA,超螺旋结构DNA(在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA)
其实这三种结构分子量相同,由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同,因此出现三条条带。
标准的质粒提取实验中只存在后两种结构,线性DNA是由于提取操作过于剧烈或缓冲溶液pH不适宜造成的DNA断裂。
楼主可以做个单酶切,一目了然。
2楼2017-03-07 09:17:52
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xiaoxi520

新虫 (初入文坛)

有用预制胶吗?简单方便

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-03-07 11:30:40
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ruoxinhappy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bush119 at 2017-03-07 09:17:52
质粒在琼脂糖凝胶电泳中存在三条电泳条带,按照Marker的位置从大到小依次为:线性DNA,松散的环状DNA,超螺旋结构DNA(在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA)
其实这三种结构分子量相同,由于 ...

好的,谢谢,我单酶切试试
4楼2017-03-07 13:00:08
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

自制的提取试剂也不麻烦 如果你确定试剂没有区别的话 验证一下吸附柱
试剂盒里面是吸附柱 自制试剂往往用乙醇沉淀法回收DNA 耗时长
柱子也比较便宜 一个2毛钱左右的柱子回收效率就不错了 也有更便宜的 慢慢找
5楼2017-03-08 09:53:20
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

从照片上看 回收率明显有问题 这里可以怀疑吸附柱是否存在问题
自制溶液DNA提取效果也不好,看不到超螺旋条带 这个和吸附柱没关系
所以我仍然怀疑试剂存在某方面问题
6楼2017-03-08 09:55:58
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

如果你提的是5ml菌液的话 试剂盒提的质粒浓度也不算高
7楼2017-03-08 09:57:12
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