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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助各位大神，帮我看看有关细胞培养和激光扫描共焦实验~~跪谢，悬赏两金
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cindy881101

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大神，帮我看看有关细胞培养和激光扫描共焦实验~~跪谢，悬赏两金

我是细胞方面的新手，实验室也没有人在做相关的，求助各位生物的大神帮我看看
我是做一种农药胁迫下对鲫鱼肝和脑细胞损伤的实验，之前做了扫描和透射观察组织，这最后一步用激光扫描共聚焦看肝和脑细胞损伤，问题如下：
1、肝和脑细胞直接从解剖的鱼组织中提取，我还需要培养吗？属于原代培养吗？可以直接用胰酶分解后制片吗？
2、因为是基金内容，规定用的染剂是DAPI和FITC，DAPI染核是常用的，FITC的操作我怎么看都是和Annexin一起双染，FITC可以看到细胞膜的变化情况吗？FITC和DAPI可以一起染吗？实在没看到相关内容。求大神解决，或者推荐别的染剂，我的目的就是染细胞核和细胞膜。
3、另外农药染毒会引起细胞凋亡吗？这属于细胞坏死还是凋亡呢？可以做钙离子浓度变化的实验吗？
4、谁有相关文献也可以推荐我下
本人苦逼女研究生一枚、、、、实在被实验搞崩溃了！！新人一枚，金币实在不多，还请各位大神见谅，求解答~~
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逆风飞翔
1楼 2013-09-06 10:12:22
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cindy881101

新虫 (初入文坛)
为什么没人回捏~~大神大神快来啊
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逆风飞翔
2楼2013-09-07 14:38:57
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+3, 应助指数+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-17 20:13:42
137167741: 金币+3, 应助指数+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-17 20:14:43
cindy881101: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-11-07 09:25:21
1.培养了细胞损伤不就恢复了吗。应该是直接制片。（你的胁迫实验是直接对动物的吧。）或原代培养非胁迫细胞，然后给农药，制片。
2.FITC是用来标记蛋白的荧光探针，Annexin-V是FITC标记的蛋白。这是标准方法，你能从试剂盒说明中找到操作方法。另外标记完是要做流式细胞还是免疫荧光，和测过的仪器使用者多交流一下。
3.凋亡还是坏死没通过流式细胞仪能测出来，凋亡的指标很多，你要根据你的实验要求选择方法去。农药也分许多种，是凋亡还是坏死得看你的实验结果。
4.相关文献自己查吧。凋亡相关的太多了，实验方面相关试剂盒的说明书比文献有用。
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3楼2013-09-17 15:41:00
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chenliwuxj
4楼2014-02-26 17:56:35
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