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沉沦魔之不朽

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教一下小鼠皮肤组织匀浆快捷有效的制法

在制作小鼠皮肤组织匀浆的时候,发现皮肤组织韧性特别高。
试了高速剪切,结果粘在刀头上切不碎;
用手持式匀浆器倒是有效果但是一小时才能磨碎一个样品。。手酸啊。样品多的时候受不了啊。

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lumeiniu

新虫 (初入文坛)

我最近也要做小鼠皮肤匀浆,想请教您一些问题
1、文献上都说取小鼠皮肤去皮下脂肪,皮下脂肪好去除么?
2、您最后用的什么方法制作的小鼠匀浆,手持匀浆器么?
3、一个样品大概得匀多长时间,匀到什么程度?
这个问题对我很重要,盼回复
4楼2017-06-24 09:36:02
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查看全部 6 个回答

Jerry潇潇

铜虫 (小有名气)

1、取肝脏1g,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入5或10ml的小烧杯内
2、用移液管量取0.86%冷生理盐水,生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中)。
3、手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,使组织匀浆化。
4、将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10~15分钟,若检测ATP酶,则只需要1000转/分,离心5分钟,将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。
根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种测定

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2楼2017-03-04 13:19:21
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Jerry潇潇

铜虫 (小有名气)

这是在别人那里看到的,希望对你有帮助

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3楼2017-03-04 13:19:54
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沉沦魔之不朽

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lumeiniu at 2017-06-24 09:36:02
我最近也要做小鼠皮肤匀浆,想请教您一些问题
1、文献上都说取小鼠皮肤去皮下脂肪,皮下脂肪好去除么?
2、您最后用的什么方法制作的小鼠匀浆,手持匀浆器么?
3、一个样品大概得匀多长时间,匀到什么程度?
这 ...

你好啊,我自己摸索的处理方法:
1.小鼠皮肤取的时候,最好麻醉后活体取,小鼠一旦死亡,皮肤马上皱缩,不好定量也不好取下。
2.取皮肤的时候用眼科剪,提起皮肤后慢慢剪,不要剪到皮下组织,双侧肾区筋膜血管比较多,要格外仔细。
3.取下之后,放入PBS(要求高)或生理盐水(要求不高)中洗去残留的血液,然后用手术刀轻轻刮去皮下脂肪,取得时候操作好的话,皮下脂肪一般不多。
4.匀浆的时候,手持式玻璃匀浆器,最简便最便宜,几块钱一个,但是比较耗费人力而且研磨过程会发热,可能会对一些不稳定成分产生影响。有专门的冷冻研磨匀浆机,不过要十来万,看经费。
5.我现在还是用的手持式玻璃匀浆器,研磨10min,每隔2.5min活动混匀一次。取上层乳白色匀浆液,离心过滤,-20℃保存带用。根据用途可能还需要除蛋白除磷脂等前处理操作。。

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5楼2017-07-05 17:35:05
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