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请教一下小鼠皮肤组织匀浆快捷有效的制法
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在制作小鼠皮肤组织匀浆的时候，发现皮肤组织韧性特别高。 试了高速剪切，结果粘在刀头上切不碎； 用手持式匀浆器倒是有效果但是一小时才能磨碎一个样品。。手酸啊。样品多的时候受不了啊。 发自小木虫Android客户端 |
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Jerry潇潇
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3楼2017-03-04 13:19:54
Jerry潇潇
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1、取肝脏1g，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内 2、用移液管量取0.86％冷生理盐水，生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。 3、手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。 4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10～15分钟，若检测ATP酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-03-04 13:19:21
4楼2017-06-24 09:36:02
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你好啊，我自己摸索的处理方法： 1.小鼠皮肤取的时候，最好麻醉后活体取，小鼠一旦死亡，皮肤马上皱缩，不好定量也不好取下。 2.取皮肤的时候用眼科剪，提起皮肤后慢慢剪，不要剪到皮下组织，双侧肾区筋膜血管比较多，要格外仔细。 3.取下之后，放入PBS（要求高）或生理盐水（要求不高）中洗去残留的血液，然后用手术刀轻轻刮去皮下脂肪，取得时候操作好的话，皮下脂肪一般不多。 4.匀浆的时候，手持式玻璃匀浆器，最简便最便宜，几块钱一个，但是比较耗费人力而且研磨过程会发热，可能会对一些不稳定成分产生影响。有专门的冷冻研磨匀浆机，不过要十来万，看经费。 5.我现在还是用的手持式玻璃匀浆器，研磨10min，每隔2.5min活动混匀一次。取上层乳白色匀浆液，离心过滤，-20℃保存带用。根据用途可能还需要除蛋白除磷脂等前处理操作。。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-07-05 17:35:05
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