应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神，分子基础薄弱 引物设计扩不出来!
1011/3返回列表123下一页
查看: 6352  |  回复: 100
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

艾喵喵

木虫 (正式写手)

[交流] 求助大神，分子基础薄弱 引物设计扩不出来!

我的目的基因序列TTGGACAACGCCTTCCCCTTCGGGACATGCATCAACACGTCCGTCATCCAGAAGCCGGCCTTCCTCGACTTCTTCACCAACCACTTCGACTGGGCCGTCTTCGAGAACGAGCTCAAGTGGTACCACACGGAGGTGCAGCAGGGCCAGCTCAACTACGCCGACGCCGACGCGCTGCTCGCGTTCTGCGACCGCCTGGGCAAGACCGTCCGCGGCCACTGCGTCTTCTGGTCCGTGGACGGCGACGTGCAGCAGTGGGTCAAGAACCTCAACAAGGACCAGCTCAGGTCCGCCATGCAGAGCCGCCTCGAGGGCCTCGTCTCCCGCTACGCCGGCAGGTTCAAGCACTACGACGTCAACAACGAGATGCTGCACGGCCGCTTCTTCCGGGACCGCCTCGGCGACGAGGACGTCCCGGCGTACATGTTCAAGGAGGTGGCGCGGCTGGACCCGGAGCCCGTGCTCTTCGTCAACGACTACAACGTGGAGTGCGGCAACGACCCCAACGCGACGCCGGAGAAGTACGCCGAGCAGGTCGCATGGCTGCAGAGCTGCGGCGCGGTGGTGCGCGGCATCGGGCTGCAGGGCCACGTGCAAAACCCGGTCGGGGAGGTCATCTGCGCCGCGCTCGACAGGCTCGCCAAGACGGGGGTGCCCATCTGGTTCACCGAGCTCGACGTGCCGGAGTACGACGTGGGCCTCCGCGCCAAGGACCTGGAGGTGGTGCTCCGGGAGGCGTACGCGCACCCGGCCGTGGAGGGCATCGTGTTCTGGGGCTTCATGCAGGGCACAATGTGGCGCCAGAACGCTTGGCTCGTCGACGCCGATGGCACCGTCAACGAGGCGGGCCAGATGTTCCTGAATCTGCAGAAGGAGTGGAAG

设计的引物  F:5'  AGACCG  GAATTC  CGGACC   TTGGACAACGCCTTC  3' 酶切位点 EcoRI  GC含量57.6%  TM值70.1

                   R:5'  ATT  GCGGCCGC  TTA  TCA  CTTCCACTCCTTCTGC  3'  酶切位点 NotI    GC含量54.5%   TM值68.7


前后引物均加酶切位点和保护碱基 尝试过退火温度58-64均没有P出来目的条带还尝试过55度也没有p出来  不知道是什么原因

求各位大神指点，小妹不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-02-25 17:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

莫等闲111

版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-26 08:55:19
设计的引物  F:5'  AGACCG  GAATTC  CGGACC   TTGGACAACGCCTTC  3' 酶切位点 EcoRI  GC含量57.6%  TM值70.1

                   R:5'  ATT  GCGGCCGC  TTA  TCA  CTTCCACTCCTTCTGC  3'  酶切位点 NotI    GC含量54.5%   TM值68.7
你的引物设计的有问题  比如说R:5端 加酶切位点前后都加了保护碱基 ，而且你的保护碱基貌似也不对，有相应的表的，http://wenku.baidu.com/link?url= ... wp-DAwczvXc81arqjsy；
我感觉可以设计成这样R：5- AAGGAAAAAAGCGGCCGC  CTTCCACTCCTTCTGC 3-；同理F也一样。
另外注意               (1)酶及其浓度；
                           (2)模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一；
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2017-02-25 18:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艾喵喵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-02-25 18:00:54
设计的引物  F:5'  AGACCG  GAATTC  CGGACC   TTGGACAACGCCTTC  3' 酶切位点 EcoRI  GC含量57.6%  TM值70.1

                   R:5'  ATT  GCGGCCGC  TTA  TCA  CTTCCACTCCTTCTGC  3'  酶切位点 NotI    GC含量 ...

谢谢你，我的下游引物的保护碱基是按照一个硕士论文里添加的，我看他也用了NotI这个酶切位点

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-02-25 18:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁回首

新虫 (初入文坛)
★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
我是来学习的，小白一个刚接触

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
31楼2017-02-25 19:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

598878157

版主 (文学泰斗)
★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
111111111111111
赞一下 回复此楼
34楼2017-02-25 20:26:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艾喵喵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by 雁回首 at 2017-02-25 19:33:54
我是来学习的，小白一个刚接触

可以切磋一下

发自小木虫Android客户端
回复此楼
37楼2017-02-25 21:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winteran

新虫 (小有名气)
★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
你这基因不像CDS区啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
42楼2017-02-25 21:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
45楼2017-02-25 21:24:25
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

艾喵喵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
44楼: Originally posted by 哈哈狂风暴雨 at 2017-02-25 21:24:15

怎么了？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
47楼2017-02-25 21:26:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艾喵喵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
42楼: Originally posted by winteran at 2017-02-25 21:22:04
你这基因不像CDS区啊

我这是全长CDS截取了一部分

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
48楼2017-02-25 21:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艾喵喵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 皖北+ at 2017-02-25 19:11:33

不要抱抱，要帮助

发自小木虫Android客户端
回复此楼
50楼2017-02-25 21:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dsctg2楼
2017-02-25 17:49   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
syhorchid3楼
2017-02-25 17:54   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
xiaoqiuqiu204楼
2017-02-25 17:59   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
超级老快6楼
2017-02-25 18:07   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
yaoyao1458楼
2017-02-25 18:09   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
低价核磁9楼
2017-02-25 18:10   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
巨兽10楼
2017-02-25 18:11   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
tan91411楼
2017-02-25 18:16   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
莲花如梦12楼
2017-02-25 18:17   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
重温旧游13楼
2017-02-25 18:18   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
朝都14楼
2017-02-25 18:27   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端
冰火图腾15楼
2017-02-25 18:31   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
备皮刀16楼
2017-02-25 18:44   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
喧哗17楼
2017-02-25 18:54   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
hongyingwu18楼
2017-02-25 18:58   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
zhenwuhuang19楼
2017-02-25 19:03   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
tableman20楼
2017-02-25 19:03   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
bj200898921楼
2017-02-25 19:07   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
皖北+22楼
2017-02-25 19:11   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
hubaolong37023楼
2017-02-25 19:15   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫IOS客户端
sony862024楼
2017-02-25 19:18   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
顶 发自小木虫IOS客户端
slytjiaofei25楼
2017-02-25 19:20   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
longwave26楼
2017-02-25 19:22   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
grase27楼
2017-02-25 19:24   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
李晓亮587828楼
2017-02-25 19:24   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
youngen29楼
2017-02-25 19:26   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
gengxin6030楼
2017-02-25 19:27   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
祝福
纳米材料75332楼
2017-02-25 19:34   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
假大空33楼
2017-02-25 20:10   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
-
nono200935楼
2017-02-25 20:32   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
·
41588116836楼
2017-02-25 20:32   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
叶∏_∏38楼
2017-02-25 21:15   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
迪马利亚39楼
2017-02-25 21:17   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
chentao40楼
2017-02-25 21:20   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
nbjiuxu41楼
2017-02-25 21:21   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
光表43楼
2017-02-25 21:23   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
哈哈狂风暴雨44楼
2017-02-25 21:24   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
艾喵喵46楼
2017-02-25 21:26   回复  
引用回帖:
45楼: Originally posted by 陈小苏 at 2017-02-25 21:24:25 是一

？ 发自小木虫Android客户端
逗比的威威49楼
2017-02-25 21:27   回复  
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 艾喵喵 的主题更新
1011/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 6/300 2026-10-26 02:42 by cLOojpOxkX0G
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-26 02:29 by cLOojpOxkX0G
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:25 by cLOojpOxkX0G
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-26 02:16 by cLOojpOxkX0G
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 4/200 2026-10-26 01:50 by cLOojpOxkX0G
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 5/250 2026-10-26 01:39 by cLOojpOxkX0G
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 3/150 2026-10-26 01:37 by cLOojpOxkX0G
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 7/350 2026-10-26 01:11 by cLOojpOxkX0G
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 12/600 2026-10-26 00:54 by cLOojpOxkX0G
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 9/450 2026-10-26 00:28 by cLOojpOxkX0G
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 8/400 2026-10-26 00:21 by cLOojpOxkX0G
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 5/250 2026-10-26 00:19 by cLOojpOxkX0G
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 GVGRDgNfv7P4 2026-10-23 10/500 2026-10-26 00:15 by cLOojpOxkX0G
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 GVGRDgNfv7P4 2026-10-23 5/250 2026-10-26 00:08 by cLOojpOxkX0G
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 3/150 2026-10-25 20:11 by cLOojpOxkX0G
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 4/200 2026-10-25 01:22 by XcOYG53d3x4p
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 8/400 2026-10-25 00:15 by XcOYG53d3x4p
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 3/150 2026-10-24 18:23 by WqtG0Aem8Ufl
[文学芳草园] 亲密关系 +7 宋昙 2026-10-21 13/650 2026-10-23 17:07 by 小牧11
[考博] 郑州大学申博 +5 stars~ 2026-10-19 8/400 2026-10-22 15:06 by stars~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭