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至尊木虫 (文坛精英)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
59楼2017-02-25 22:21:51
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zaofa1108

新虫 (小有名气)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
是不是5端 加酶切位点时只要在前面加保护碱基就可以了?

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62楼2017-02-25 23:55:41
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刘成功

木虫 (著名写手)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
68楼2017-02-26 00:58:21
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mochenmi

铜虫 (小有名气)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
你这个酶切位点保护碱基明显加错了;另外pcr体系认真配,认真混匀;还有退火温度设成54度,因为Tm值是不看酶切位点和保护碱基的

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69楼2017-02-26 01:03:21
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艾喵喵

木虫 (正式写手)


引用回帖:
62楼: Originally posted by zaofa1108 at 2017-02-25 23:55:41
是不是5端 加酶切位点时只要在前面加保护碱基就可以了?

我之前问一个师兄他说5端和3端都加保护碱基

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76楼2017-02-26 08:18:59
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0大坏熊0

铜虫 (初入文坛)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
Tm值有没有算额外添加的酶切位点呐?我印象中不该算吧。

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92楼2017-02-27 08:32:13
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
目的片段GC含量66%,要使用GC buffer。
93楼2017-02-27 09:18:03
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痞子无敌

金虫 (正式写手)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
我也薄弱…为什么引物要加保护碱基……

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94楼2017-02-27 10:04:28
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艾喵喵

木虫 (正式写手)


引用回帖:
93楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-27 09:18:03
目的片段GC含量66%,要使用GC buffer。

为什么要使用啊

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95楼2017-02-27 10:27:38
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艾喵喵

木虫 (正式写手)


引用回帖:
92楼: Originally posted by 0大坏熊0 at 2017-02-27 08:32:13
Tm值有没有算额外添加的酶切位点呐?我印象中不该算吧。

算了,算上了酶切位点还有保护碱基

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96楼2017-02-27 10:28:09
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艾喵喵

木虫 (正式写手)


引用回帖:
62楼: Originally posted by zaofa1108 at 2017-02-25 23:55:41
是不是5端 加酶切位点时只要在前面加保护碱基就可以了?

我不太懂,问我们实验室四楼的一个师兄,他说要加,我就加了,我不懂

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97楼2017-02-27 10:28:53
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
保护碱基太多了吧,酶切位点序列前后都加了?保护碱基2至3个就可以。

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99楼2017-06-07 22:35:40
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demonhb

新虫 (小有名气)


★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
76楼: Originally posted by 艾喵喵 at 2017-02-26 08:18:59
我之前问一个师兄他说5端和3端都加保护碱基
...

5端和3端加保护碱基是指上游引物和下游引物前面加保护碱基,主要是因为内切酶识别特定的DNA序列的时候还要占据识别位点两边的一些碱基,这些碱基对内切酶同DNA双链结合并发挥切割作用有很大影响的,直接暴露在末端的酶切位点不容易被酶切开,所以在设计引物时,人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列,即保护碱基,用来提高将来酶切时的活性。

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100楼2017-07-10 10:31:25
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2017-02-25 21:34   回复  
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amysmlie52楼
2017-02-25 21:45   回复  
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hydzp54楼
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大神8855楼
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yuzhuce56楼
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董环63楼
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xjd201465楼
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丁东70楼
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硬刚80楼
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tiffany12382楼
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五色带83楼
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黑虎符84楼
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空城计85楼
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慢步者86楼
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坑爹马87楼
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深囧88楼
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ylheping89楼
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zhongri90楼
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