| 查看: 5769 | 回复: 100 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助大神，分子基础薄弱 引物设计扩不出来!
|
|||
|
我的目的基因序列TTGGACAACGCCTTCCCCTTCGGGACATGCATCAACACGTCCGTCATCCAGAAGCCGGCCTTCCTCGACTTCTTCACCAACCACTTCGACTGGGCCGTCTTCGAGAACGAGCTCAAGTGGTACCACACGGAGGTGCAGCAGGGCCAGCTCAACTACGCCGACGCCGACGCGCTGCTCGCGTTCTGCGACCGCCTGGGCAAGACCGTCCGCGGCCACTGCGTCTTCTGGTCCGTGGACGGCGACGTGCAGCAGTGGGTCAAGAACCTCAACAAGGACCAGCTCAGGTCCGCCATGCAGAGCCGCCTCGAGGGCCTCGTCTCCCGCTACGCCGGCAGGTTCAAGCACTACGACGTCAACAACGAGATGCTGCACGGCCGCTTCTTCCGGGACCGCCTCGGCGACGAGGACGTCCCGGCGTACATGTTCAAGGAGGTGGCGCGGCTGGACCCGGAGCCCGTGCTCTTCGTCAACGACTACAACGTGGAGTGCGGCAACGACCCCAACGCGACGCCGGAGAAGTACGCCGAGCAGGTCGCATGGCTGCAGAGCTGCGGCGCGGTGGTGCGCGGCATCGGGCTGCAGGGCCACGTGCAAAACCCGGTCGGGGAGGTCATCTGCGCCGCGCTCGACAGGCTCGCCAAGACGGGGGTGCCCATCTGGTTCACCGAGCTCGACGTGCCGGAGTACGACGTGGGCCTCCGCGCCAAGGACCTGGAGGTGGTGCTCCGGGAGGCGTACGCGCACCCGGCCGTGGAGGGCATCGTGTTCTGGGGCTTCATGCAGGGCACAATGTGGCGCCAGAACGCTTGGCTCGTCGACGCCGATGGCACCGTCAACGAGGCGGGCCAGATGTTCCTGAATCTGCAGAAGGAGTGGAAG 设计的引物 F:5' AGACCG GAATTC CGGACC TTGGACAACGCCTTC 3' 酶切位点 EcoRI GC含量57.6% TM值70.1 R:5' ATT GCGGCCGC TTA TCA CTTCCACTCCTTCTGC 3' 酶切位点 NotI GC含量54.5% TM值68.7 前后引物均加酶切位点和保护碱基 尝试过退火温度58-64均没有P出来目的条带还尝试过55度也没有p出来 不知道是什么原因 求各位大神指点，小妹不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
上海87年GG诚求女友
+1/172
-
保障电池制造超纯环境：威格科技电池生产全线解决方案
+1/87
-
信息工程大学教授团队网络空间安全专业博士招生【2026年1月31日报名截止】
+1/75
-
华中科技大学周英教授招博后
+1/35
-
[长期合作招募] 同济大学肖倩老师团队诚邀港澳学者学术交流
+1/34
-
东北林业大学刘松教授课题组长期招收博士、博士后
+1/34
-
西工大可塑性液体材料课题组招收软物质、流体力学、细胞工程等背景博士生
+1/31
-
【教授本人】南佛罗里达大学化学系刘文奇课题组 2026 Fall 招收有机/超分子方向博士生
+1/30
-
中国地质大学（武汉）分析地球化学团队招收博士生1名、硕士生3名
+2/28
-
悉尼大学 AMME 机械工程 双ARC Future Fellows团队招收CSC博士生
+1/27
-
沈阳征女友
+1/26
-
南京林业大学木质纤维功能材料国际联合创新中心招收2026级博士生（申请-考核制）
+2/20
-
帮导师招2026CSC博士（巴塞罗那自治大学UAB-CSC博士项目）
+1/18
-
西南大学化学化工学院彭云贵教授课题组招有机化学博士研究生
+2/18
-
云南大学智能光电子课题组招收申请-考核博士研究生1名（光电、光学）
+1/16
-
哈尔滨工业大学（深圳）-包斌招收2026年博士研究生及博士后
+1/13
-
北京工业大学高靓教授课题组2026级博士研究生招生
+1/9
-
意大利米兰理工大学Lorenza Petrini教授招收玛丽居里MEDALLOY博士
+1/3
-
福州大学梁宇航副教授招收2026年申核制博士研究生/硕士研究生（理论计算方向）
+1/2
-
河北工业大学层状材料与器件团队诚聘 二维材料与原位电子显微学方向青年教师与博士后
+1/1
59楼2017-02-25 22:21:51
★ ★ ★ ★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-26 08:55:19
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-26 08:55:19
|
设计的引物 F:5' AGACCG GAATTC CGGACC TTGGACAACGCCTTC 3' 酶切位点 EcoRI GC含量57.6% TM值70.1 R:5' ATT GCGGCCGC TTA TCA CTTCCACTCCTTCTGC 3' 酶切位点 NotI GC含量54.5% TM值68.7 你的引物设计的有问题 比如说R:5端 加酶切位点前后都加了保护碱基 ，而且你的保护碱基貌似也不对，有相应的表的，http://wenku.baidu.com/link?url= ... wp-DAwczvXc81arqjsy； 我感觉可以设计成这样R：5- AAGGAAAAAAGCGGCCGC CTTCCACTCCTTCTGC 3-；同理F也一样。 另外注意 (1)酶及其浓度； (2)模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一； |
5楼2017-02-25 18:00:54
7楼2017-02-25 18:08:15
简单回复
低价核磁9楼
2017-02-25 18:10
回复
巨兽10楼
2017-02-25 18:11
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
重温旧游13楼
2017-02-25 18:18
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
朝都14楼
2017-02-25 18:27
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端