| 查看: 5774 | 回复: 100 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助大神，分子基础薄弱 引物设计扩不出来!
|
|||
|
我的目的基因序列TTGGACAACGCCTTCCCCTTCGGGACATGCATCAACACGTCCGTCATCCAGAAGCCGGCCTTCCTCGACTTCTTCACCAACCACTTCGACTGGGCCGTCTTCGAGAACGAGCTCAAGTGGTACCACACGGAGGTGCAGCAGGGCCAGCTCAACTACGCCGACGCCGACGCGCTGCTCGCGTTCTGCGACCGCCTGGGCAAGACCGTCCGCGGCCACTGCGTCTTCTGGTCCGTGGACGGCGACGTGCAGCAGTGGGTCAAGAACCTCAACAAGGACCAGCTCAGGTCCGCCATGCAGAGCCGCCTCGAGGGCCTCGTCTCCCGCTACGCCGGCAGGTTCAAGCACTACGACGTCAACAACGAGATGCTGCACGGCCGCTTCTTCCGGGACCGCCTCGGCGACGAGGACGTCCCGGCGTACATGTTCAAGGAGGTGGCGCGGCTGGACCCGGAGCCCGTGCTCTTCGTCAACGACTACAACGTGGAGTGCGGCAACGACCCCAACGCGACGCCGGAGAAGTACGCCGAGCAGGTCGCATGGCTGCAGAGCTGCGGCGCGGTGGTGCGCGGCATCGGGCTGCAGGGCCACGTGCAAAACCCGGTCGGGGAGGTCATCTGCGCCGCGCTCGACAGGCTCGCCAAGACGGGGGTGCCCATCTGGTTCACCGAGCTCGACGTGCCGGAGTACGACGTGGGCCTCCGCGCCAAGGACCTGGAGGTGGTGCTCCGGGAGGCGTACGCGCACCCGGCCGTGGAGGGCATCGTGTTCTGGGGCTTCATGCAGGGCACAATGTGGCGCCAGAACGCTTGGCTCGTCGACGCCGATGGCACCGTCAACGAGGCGGGCCAGATGTTCCTGAATCTGCAGAAGGAGTGGAAG 设计的引物 F:5' AGACCG GAATTC CGGACC TTGGACAACGCCTTC 3' 酶切位点 EcoRI GC含量57.6% TM值70.1 R:5' ATT GCGGCCGC TTA TCA CTTCCACTCCTTCTGC 3' 酶切位点 NotI GC含量54.5% TM值68.7 前后引物均加酶切位点和保护碱基 尝试过退火温度58-64均没有P出来目的条带还尝试过55度也没有p出来 不知道是什么原因 求各位大神指点，小妹不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
西南大学化学化工学院彭云贵教授课题组招有机化学博士研究生
+2/112
-
广东工业大学自动化学院鲁仁全教授团队刘勇华老师招收2026年博士研究生（申请制）
+1/98
-
南京林业大学特聘教授招聘博后和博士研究生
+1/89
-
南京林业大学特聘教授团队招聘博后和2026博士研究生
+1/87
-
大连理工大学智能系统实验室优秀硕博研究生招生
+1/80
-
南方医科大学发育生物学教研室夏来新教授课题组招收26级博士研究生
+1/80
-
深圳大学信息功能聚合物电介质方向“申请-考核制”博士生招生
+1/78
-
中国地质大学（武汉）地质学、地质资源与地质工程、资源与环境方向招生，请尽快联系！
+1/68
-
中国科协青年托举（针对32岁青年人才的）是不是不搞了，25年都没有通知
+1/67
-
自驾淄博回四川遂宁过年，寻找小伙伴一起
+1/65
-
西交利物浦大学黄彪院士招收26年全奖博士生1名（工业智能方向）
+1/31
-
【青岛大学】2026年生物医药博士生招生（含少数民族骨干人才）
+1/23
-
华南理工大学(985、广州) 氢能源技术课题组诚招博士后（不限专业）
+2/22
-
博士后, 博士招生 美国大纽约地区 NJIT
+1/16
-
93年坐标北京，征女友
+1/14
-
中科院杭州医学研究所方晓红课题组-上海交大肖泽宇课题组联合招聘博士后及科研助理
+2/10
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/5
-
中国计量大学叶德茂课题组招收博士研究生（欢迎计算机类、电子信息类等专业）
+1/4
-
复旦大学2026年博士研究生，“药学 + 合成生物学”
+1/4
-
南开大学齐迹课题组诚聘分子生物学、免疫学、有机分子合成相关方向的博士后、博士硕士
+1/3
31楼2017-02-25 19:33:54
★ ★ ★ ★
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-26 08:55:19
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-26 08:55:19
|
设计的引物 F:5' AGACCG GAATTC CGGACC TTGGACAACGCCTTC 3' 酶切位点 EcoRI GC含量57.6% TM值70.1 R:5' ATT GCGGCCGC TTA TCA CTTCCACTCCTTCTGC 3' 酶切位点 NotI GC含量54.5% TM值68.7 你的引物设计的有问题 比如说R:5端 加酶切位点前后都加了保护碱基 ，而且你的保护碱基貌似也不对，有相应的表的，http://wenku.baidu.com/link?url= ... wp-DAwczvXc81arqjsy； 我感觉可以设计成这样R：5- AAGGAAAAAAGCGGCCGC CTTCCACTCCTTCTGC 3-；同理F也一样。 另外注意 (1)酶及其浓度； (2)模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一； |
5楼2017-02-25 18:00:54
7楼2017-02-25 18:08:15
简单回复
低价核磁9楼
2017-02-25 18:10
回复
巨兽10楼
2017-02-25 18:11
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
重温旧游13楼
2017-02-25 18:18
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
朝都14楼
2017-02-25 18:27
回复
艾喵喵(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端