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ywc193x

金虫 (正式写手)

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专业: 抗体工程学

[求助] elisa反应异常已有5人参与

大家好，最近做实验有如下现象，麻烦各位解惑！

   实验一：我做elisa实验，包被蛋白A，用抗A的鼠单抗与之反应，再用酶标二抗反应，最后显色，证明蛋白A和抗A抗体能反应；

   实验二：我包被蛋白A，用蛋白A（3个浓度梯度，最高的和包被浓度一样）和抗A的鼠单抗一同加入到微孔中反应，再用酶标二抗反应，最后显色，结果发现没发生竞争反应，不知道原因？？

   实验三：我更换反应buffer（5.0、6.0、7.4、8.5、9.0），重复实验二，结果也是一样不发生竞争反应。

   请问各位有没有碰到同样的情况，怎么解决啊？？

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爱生活爱自己

1楼 2017-02-21 16:12:07

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ywc193x

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 258804873 at 2017-02-24 14:25:01
首先要摸索包被蛋白、一抗和二抗的最佳工作浓度，浓度过高会遮蔽竞争。
其次，需要对照试验，包括二抗对包被蛋白的结合检测，已确保二抗对包被蛋白没有交叉反应。
还有一个疑问就是，没有封闭蛋白？？？如有封闭蛋 ...

首先，包被蛋白、一抗和二抗的最佳工作浓度是优化过的
其次，都设置了对照实验，没非特异性反应
用3%BSA封闭过的