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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达重组质粒酶切求助！！！！！！！！！
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weizengmiao

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达重组质粒酶切求助！！！！！！！！！ 已有1人参与

各位老师，我的重组质粒大小在6600kb左右，pcr结果阳性，重组质粒设计引物，然后测序，结果也证实构建成功的。但是我酶切无数次了都没有切除我的900 bp的条带。设计的酶切位点是EcoRI和KpnI，所用的缓冲液是T+BSA。酶切体系为 质粒 5 uL、酶各1 uL、缓冲液 1 uL，酶切体系为20 uL。酶切时间2 h、3 h、4 h、12 h 都做过，都没有目的片段，只有一条比重组质粒小一点的条带。有没有老师也遇到过这种情况呀？我问题出在哪里呢？快绝望了。求指导呀！！！！
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1楼 2017-02-19 19:13:44
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你提供的信息，两个可能。1，buffer要用2ul吧？ 2. 你质粒浓度多少？感觉你切开了，但量不够。最好来张胶图

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2017-02-19 20:20:55
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weizengmiao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-19 20:20:55
从你提供的信息，两个可能。1，buffer要用2ul吧？ 2. 你质粒浓度多少？感觉你切开了，但量不够。最好来张胶图

谢谢！才出完差回来，我明天试试用2 ul buffer，我的质粒浓度只跑过胶看条带亮度，没有去测过。
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3楼2017-02-21 22:32:35
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PH=6

新虫 (初入文坛)
请问您问题解决了嘛

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4楼2019-07-16 10:54:07
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