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大头妞妞

新虫 (小有名气)

[交流] 求师兄师姐指教SYBR-Green1荧光定量PCR试验 已有4人参与

求师兄师姐指教,
我的问题是这样的:做的是SYBR-Green1荧光定量PCR试验,原理我都看了,但是看到最后并不知我的未知样品具体怎么测,我自己的理解是,待我将我所有的QPCR反应体系和程序都优化后(标准曲线OK,标准品重复试验OK,引物特异性QPCR检测OK),那么我就将我的未知样品稀释后与我的标准品一起放在定量PCR仪上反应是吗(PS,未知样品稀释的范围在标准品之内),是这样吗,????
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seascen2016

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
差不多,不过未知样本稀释是什么鬼?你知道怎么稀释能在标曲内?

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2楼2017-02-16 22:01:17
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-16 22:01:17
差不多,不过未知样本稀释是什么鬼?你知道怎么稀释能在标曲内?

那未知样品要怎么破?怎么处理才能放在和最后处理的标准品一起反应?这是我在资料上面看到的,不应该是这样吗?求指教
求师兄师姐指教SYBR-Green1荧光定量PCR试验



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3楼2017-02-17 09:49:01
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贾子阳009

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你想法是对的,稀释一次如果不能在曲线内,至少会提供一个参考。那就再做一次!

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4楼2017-02-17 18:05:18
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 贾子阳009 at 2017-02-17 18:05:18
你想法是对的,稀释一次如果不能在曲线内,至少会提供一个参考。那就再做一次!

谢谢指教,清楚了
5楼2017-02-17 21:30:33
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
6楼2017-02-19 09:50:33
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林志遥-14

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
理解的基本正确,可以做一次试试了

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7楼2017-02-19 10:10:30
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wsy0914 at 2017-02-19 09:50:33
标准曲线怎么做?我那个扩增率只有80%,怎么改进?求指导...

可以问一下你的PCR反应体系都是怎么摸索的吗,我的一对95bp的引物怎么都没弄出来,求指教,要不建议,可以加你QQ私聊吗
8楼2017-02-19 12:10:51
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 贾子阳009 at 2017-02-17 18:05:18
你想法是对的,稀释一次如果不能在曲线内,至少会提供一个参考。那就再做一次!

可以再请教一下,做QPCR前PCR摸索反应体系都是怎么摸索的呢,如果遇到短片段引物(95bp,上下游引物Tm相差8摄氏度)怎么处理呢,谢谢了
9楼2017-02-19 12:19:52
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