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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 求师兄师姐指教SYBR-Green1荧光定量PCR试验
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

[交流] 求师兄师姐指教SYBR-Green1荧光定量PCR试验 已有4人参与

求师兄师姐指教，
我的问题是这样的：做的是SYBR-Green1荧光定量PCR试验，原理我都看了，但是看到最后并不知我的未知样品具体怎么测，我自己的理解是，待我将我所有的QPCR反应体系和程序都优化后（标准曲线OK，标准品重复试验OK，引物特异性QPCR检测OK），那么我就将我的未知样品稀释后与我的标准品一起放在定量PCR仪上反应是吗(PS,未知样品稀释的范围在标准品之内)，是这样吗，？？？？
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1楼 2017-02-16 21:51:20
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seascen2016

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
差不多，不过未知样本稀释是什么鬼？你知道怎么稀释能在标曲内?

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2楼2017-02-16 22:01:17
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-16 22:01:17
差不多，不过未知样本稀释是什么鬼？你知道怎么稀释能在标曲内?

那未知样品要怎么破？怎么处理才能放在和最后处理的标准品一起反应？这是我在资料上面看到的，不应该是这样吗？求指教
求师兄师姐指教SYBR-Green1荧光定量PCR试验



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3楼2017-02-17 09:49:01
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贾子阳009

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你想法是对的，稀释一次如果不能在曲线内，至少会提供一个参考。那就再做一次！

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4楼2017-02-17 18:05:18
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 贾子阳009 at 2017-02-17 18:05:18
你想法是对的，稀释一次如果不能在曲线内，至少会提供一个参考。那就再做一次！

谢谢指教，清楚了
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5楼2017-02-17 21:30:33
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼2017-02-19 09:50:33
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林志遥-14

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
理解的基本正确，可以做一次试试了

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7楼2017-02-19 10:10:30
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wsy0914 at 2017-02-19 09:50:33
标准曲线怎么做？我那个扩增率只有80%，怎么改进？求指导...

可以问一下你的PCR反应体系都是怎么摸索的吗，我的一对95bp的引物怎么都没弄出来，求指教，要不建议，可以加你QQ私聊吗
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8楼2017-02-19 12:10:51
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 贾子阳009 at 2017-02-17 18:05:18
你想法是对的，稀释一次如果不能在曲线内，至少会提供一个参考。那就再做一次！

可以再请教一下，做QPCR前PCR摸索反应体系都是怎么摸索的呢，如果遇到短片段引物（95bp,上下游引物Tm相差8摄氏度）怎么处理呢，谢谢了
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9楼2017-02-19 12:19:52
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