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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

[求助] 氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题 已有2人参与

又来求助了

如题，要证明转录因子对启动子的调控，采用pGREEN2-0800-LUC/REN双荧光系统，转录因子是构建到了PUC18-3HA载体上，是amp抗性的。按照操作要转入农杆菌GV3101，第一次抗性弄错了，没长，第二次用amp，整个板子都是，和抗生素失效的感觉一样，也查询了一下，似乎确实有人遇到这样的问题。

接下来要转的话，是要提高抗生素浓度呢，还是更换农杆菌菌株？请过来人指点一二，谢谢。下面是粘贴其他人的资源：

                                            标题: 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？

摘要: [请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？] 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！ 关键词:[抗性 农杆菌 表达载体 载体 菌株 实验室 质粒]……
关键词: 抗性 农杆菌 表达载体 载体 菌株 实验室 质粒


我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！
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试试GV3101、EHA103看吧。不是很清楚。
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看质粒有没有整合区。没有的话要用90RK菌株用三抗筛选。氨苄 最好换成羧卞，加利福平 庆大霉素，我记得这个菌株有两个也不三个抗性。有点记不清了 这个菌株很难做，楼主再查查 。
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
不要这样啊，这不是要重做的节奏嘛，我好不容易做好的载体
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A4用了吗
没太看懂什么意思
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
我正在做这种尝试，希望有用呀
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
谢谢你，我借个GV3101试试。
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谢谢你，我借个GV3101试试。...
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
1楼 2017-02-13 20:18:16
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innocent.

新虫 (初入文坛)
请问楼主解决了吗 我现在也遇到这样的问题 板子糊的根本做不了
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16楼2025-01-04 09:27:35
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-14 07:45:54
管它长多长少，有没有挑菌做菌落PCR验证，看有没有转进去。你验证过是不是假阳性了吗？

要验证抗生素是否失效，可以直接用感受态涂板，作为阴性对照的。

新手做实验哪能不设计对照组的呢？你老板知道看打不打死你。
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yudaoqian88
2楼2017-02-14 03:32:12
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方天翼614

新虫 (小有名气)
正在学习这方面的:请问是不是还要设计个不含有AMP的培养基作为对照啊，还是需要设计个同时含有X-Gal啊？

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yudaoqian88
3楼2017-02-14 05:03:39
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
yudaoqian88: 回帖置顶 2017-02-14 09:54:14
amp容易变坏，要新鲜配置，不能太多水汽。有一个amp替代物，carbenicilin 以后可以尝试

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yudaoqian88
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-02-14 07:44:48
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查看全部 16 个回答
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