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yudaoqian88至尊木虫 (知名作家)
不良人
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[求助]
氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题 已有2人参与
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又来求助了 如题，要证明转录因子对启动子的调控，采用pGREEN2-0800-LUC/REN双荧光系统，转录因子是构建到了PUC18-3HA载体上，是amp抗性的。按照操作要转入农杆菌GV3101，第一次抗性弄错了，没长，第二次用amp，整个板子都是，和抗生素失效的感觉一样，也查询了一下，似乎确实有人遇到这样的问题。 接下来要转的话，是要提高抗生素浓度呢，还是更换农杆菌菌株？请过来人指点一二，谢谢。下面是粘贴其他人的资源： 标题: 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？ 摘要: [请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？] 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！ 关键词:[抗性 农杆菌 表达载体 载体 菌株 实验室 质粒]…… 关键词: 抗性 农杆菌 表达载体 载体 菌株 实验室 质粒 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！ 回复 试试GV3101、EHA103看吧。不是很清楚。 回复 看质粒有没有整合区。没有的话要用90RK菌株用三抗筛选。氨苄 最好换成羧卞，加利福平 庆大霉素，我记得这个菌株有两个也不三个抗性。有点记不清了 这个菌株很难做，楼主再查查 。 回复 我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了 回复 我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了 不要这样啊，这不是要重做的节奏嘛，我好不容易做好的载体  回复 A4用了吗 没太看懂什么意思 回复 我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2. 回复 用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。 回复 用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。 我正在做这种尝试，希望有用呀 回复 我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2. 谢谢你，我借个GV3101试试。 回复 谢谢你，我借个GV3101试试。... |
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yangxp2006
铜虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 08:27:15
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 08:27:15
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以前也遇到这种问题，估计是农杆菌对氨苄有耐受性，最好的解决方法就是更换载体，换成卡那霉素抗性 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
yudaoqian8811楼2017-02-15 20:37:07
Lau_Kimura
铁虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-14 07:45:54
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-14 07:45:54
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管它长多长少，有没有挑菌做菌落PCR验证，看有没有转进去。你验证过是不是假阳性了吗？ 要验证抗生素是否失效，可以直接用感受态涂板，作为阴性对照的。 新手做实验哪能不设计对照组的呢？你老板知道看打不打死你。 |
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2楼2017-02-14 03:32:12
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正在学习这方面的:请问是不是还要设计个不含有AMP的培养基作为对照啊，还是需要设计个同时含有X-Gal啊？ 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2017-02-14 05:03:39
yudaoqian88: 回帖置顶 2017-02-14 09:54:14
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amp容易变坏，要新鲜配置，不能太多水汽。有一个amp替代物，carbenicilin 以后可以尝试 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2017-02-14 07:44:48
