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天生我材

新虫 (初入文坛)

[求助] 泛素化修饰 已有3人参与

最近在做泛素化类相关课题
过表达A蛋白下调了B蛋白的表达,然后用MG132处理之后,发现B蛋白的表达量明显回升,我认为是A蛋白促进了B蛋白的泛素化,但是我进行IP,不知道为什么过表达A之后,B的泛素化反而降低,做了很久了,一直找不到原因,有没有做这方面的同仁,是什么原因,不甚感激啊
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 22:09:39
MG132是蛋白酶抑制剂,所以能间接表明B在A的作用下被下调了。但下调的机制有很多,不一定是ubiquitination。还可能有其他机制,比如a抑制了b的转录。可能你的数据没问题,不过要讲一个不同的story

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2017-02-15 20:20:02
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 天生我材 at 2017-02-17 11:04:28
谢谢您的回复。如果是A在转录水平上抑制了B的表达,那用MG132处理后B的表达量应该不会变吧...

当然变了。不生产了,但mg132后也不降解。跟control比,就显得高.

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-02-17 11:36:33
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 天生我材 at 2017-02-17 12:15:17
我觉得你说的很有道理,那证明它在转录水平有变化,是不是只有做定量了...

这只是一个假设。你做一下qpcr,也许可能呢。再查查文献看看有没有别的机制。跟老师同学讨论下

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
7楼2017-02-17 12:21:18
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国标飞扬

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 22:10:38
如果你认为该蛋白是被泛素化降解的话,IP是要有一些注意事项的,和普通IP不一样,比如NEM加了吗?
ONE PIECE!
9楼2017-02-17 22:53:47
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普通回帖

天生我材

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-15 20:20:02
MG132是蛋白酶抑制剂,所以能间接表明B在A的作用下被下调了。但下调的机制有很多,不一定是ubiquitination。还可能有其他机制,比如a抑制了b的转录。可能你的数据没问题,不过要讲一个不同的story
...

谢谢您的回复。如果是A在转录水平上抑制了B的表达,那用MG132处理后B的表达量应该不会变吧
3楼2017-02-17 11:04:28
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天生我材

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 11:36:33
当然变了。不生产了,但mg132后也不降解。跟control比,就显得高.
...

我觉得你说的很有道理,那证明它在转录水平有变化,是不是只有做定量了
5楼2017-02-17 12:15:17
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天生我材

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 11:36:33
当然变了。不生产了,但mg132后也不降解。跟control比,就显得高.
...

一定要回复我呀
6楼2017-02-17 12:17:18
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天生我材

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 12:21:18
这只是一个假设。你做一下qpcr,也许可能呢。再查查文献看看有没有别的机制。跟老师同学讨论下
...

谢谢,那我做一下。我们每个人做的方向都不一样。跟老板讨论,老板让我自己想。谢谢你哈
8楼2017-02-17 12:25:18
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天生我材

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by 国标飞扬 at 2017-02-17 22:53:47
如果你认为该蛋白是被泛素化降解的话,IP是要有一些注意事项的,和普通IP不一样,比如NEM加了吗?

NEM没有 加,之前 做 sumo化 的时候加过 ,做泛素化的时候没有加,这个影响大吗?还有什么注意的事项吗?
10楼2017-02-22 17:41:43
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