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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 泛素化修饰
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天生我材

新虫 (初入文坛)

[求助] 泛素化修饰 已有3人参与

最近在做泛素化类相关课题
过表达A蛋白下调了B蛋白的表达，然后用MG132处理之后，发现B蛋白的表达量明显回升，我认为是A蛋白促进了B蛋白的泛素化，但是我进行IP，不知道为什么过表达A之后，B的泛素化反而降低，做了很久了，一直找不到原因，有没有做这方面的同仁，是什么原因，不甚感激啊
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1楼 2017-02-13 15:00:52
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 22:09:39
MG132是蛋白酶抑制剂，所以能间接表明B在A的作用下被下调了。但下调的机制有很多，不一定是ubiquitination。还可能有其他机制，比如a抑制了b的转录。可能你的数据没问题，不过要讲一个不同的story

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2017-02-15 20:20:02
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 天生我材 at 2017-02-17 11:04:28
谢谢您的回复。如果是A在转录水平上抑制了B的表达，那用MG132处理后B的表达量应该不会变吧...

当然变了。不生产了，但mg132后也不降解。跟control比，就显得高.

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-02-17 11:36:33
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 天生我材 at 2017-02-17 12:15:17
我觉得你说的很有道理，那证明它在转录水平有变化，是不是只有做定量了...

这只是一个假设。你做一下qpcr，也许可能呢。再查查文献看看有没有别的机制。跟老师同学讨论下

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
7楼2017-02-17 12:21:18
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国标飞扬

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-18 22:10:38
如果你认为该蛋白是被泛素化降解的话，IP是要有一些注意事项的，和普通IP不一样，比如NEM加了吗？
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ONE PIECE!
9楼2017-02-17 22:53:47
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天生我材

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-15 20:20:02
MG132是蛋白酶抑制剂，所以能间接表明B在A的作用下被下调了。但下调的机制有很多，不一定是ubiquitination。还可能有其他机制，比如a抑制了b的转录。可能你的数据没问题，不过要讲一个不同的story
...

谢谢您的回复。如果是A在转录水平上抑制了B的表达，那用MG132处理后B的表达量应该不会变吧
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3楼2017-02-17 11:04:28
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天生我材

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 11:36:33
当然变了。不生产了，但mg132后也不降解。跟control比，就显得高.
...

我觉得你说的很有道理，那证明它在转录水平有变化，是不是只有做定量了
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5楼2017-02-17 12:15:17
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天生我材

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 11:36:33
当然变了。不生产了，但mg132后也不降解。跟control比，就显得高.
...

一定要回复我呀
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6楼2017-02-17 12:17:18
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天生我材

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-02-17 12:21:18
这只是一个假设。你做一下qpcr，也许可能呢。再查查文献看看有没有别的机制。跟老师同学讨论下
...

谢谢，那我做一下。我们每个人做的方向都不一样。跟老板讨论，老板让我自己想。谢谢你哈
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8楼2017-02-17 12:25:18
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天生我材

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 国标飞扬 at 2017-02-17 22:53:47
如果你认为该蛋白是被泛素化降解的话，IP是要有一些注意事项的，和普通IP不一样，比如NEM加了吗？

NEM没有 加，之前 做 sumo化 的时候加过 ，做泛素化的时候没有加，这个影响大吗？还有什么注意的事项吗？
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10楼2017-02-22 17:41:43
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