| 查看: 1241 | 回复: 6 | ||
丽姐萍妹新虫 (正式写手)
|
[求助]
载体构建 已有1人参与
|
|
我准备将载体中的GUS切掉 插入我的目的片段 可是GUS前后的双切酶把我的载体切成了好几个片段 后期准备选用单酶切 用Pml1酶进行单酶切 可是我的片段插入到GUS的后面 表达的问题怎么解决啊？我的目的片段有起始密码子和终止密码子，这个要怎么处理啊 目的片段上的起始密码子需要去掉吗？还有GUS上的密码子呢？不懂啊 实验小白 对于这块不太清楚呢 求助！ @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有229人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17455
- 散金: 1682
- 红花: 121
- 沙发: 42
- 帖子: 14597
- 在线: 2202.2小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2017-02-08 17:18:45
yudaoqian88
至尊木虫 (知名作家)
不良人
- MolEPI: 1
- 应助: 67 (初中生)
- 金币: 26804.3
- 散金: 410
- 红花: 34
- 沙发: 15
- 帖子: 8033
- 在线: 974.6小时
- 虫号: 1430329
- 注册: 2011-10-07
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
楼主应该是想超表达你的基因吧？ 前面说用载体gus前后的内切酶切的很乱，可能是你的质粒发生了变化，楼主可以划线纯化质粒，多挑几个菌落提取质粒，做双切看是否有对的。或者从别人或别的课题要这个载体用。 再者，超表达的载体很多，不妨更换载体，避开这个问题，比你慢慢找答案快的多。 还有，一些短的标签是可以放到基因的两端的，gus我还不确定是否可以，因为它确实好大。不知道是否妨碍目的基因的功能。如果放的话，只要保证前面的基因去掉终止密码子，且不会造成后面基因发生移码，不会提前出现终止子便可。 最后，楼主早看看单酶切插入片段的方向是否和启动子是顺着的，反了也不行。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-02-09 01:08:14
|
可能你刚开始就没有分析载体的酶切位点，所以双酶切切出很多条带，如果这样，可以保证GUS后酶切位点为PmL1酶，且为单位点，过表达或沉默基因最好插入GUS前面，插入后面也不是不可以，但是不能够保证基因表达或者沉默，如果GUS前只有一个酶切位点能够选择，那就只能这样了，不用去除GUS终止密码子。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-02-09 01:33:22
丽姐萍妹
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1410.4
- 散金: 70
- 红花: 5
- 帖子: 925
- 在线: 55小时
- 虫号: 4017097
- 注册: 2015-08-11
- 性别: MM
- 专业: 观赏园艺学
|
我在做之前有分析酶切位点的 因为用的载体是优化过的了 所以具体序列我是不知道的 大体的我有分析过酶切位点的 那如果GUS后面插入目的片段不能表达的话 插入也没用啊 密码子不需要去除的吗？有没有做双价载体的啊 我是做植物的 你们是用什么载体呢？公司有卖吗？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-02-09 23:01:24
丽姐萍妹
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1410.4
- 散金: 70
- 红花: 5
- 帖子: 925
- 在线: 55小时
- 虫号: 4017097
- 注册: 2015-08-11
- 性别: MM
- 专业: 观赏园艺学
6楼2017-02-09 23:02:54
7楼2017-02-09 23:20:07
40