应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1100  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

[求助] 载体构建 已有1人参与

我准备将载体中的GUS切掉 插入我的目的片段 可是GUS前后的双切酶把我的载体切成了好几个片段 后期准备选用单酶切 用Pml1酶进行单酶切 可是我的片段插入到GUS的后面 表达的问题怎么解决啊？我的目的片段有起始密码子和终止密码子，这个要怎么处理啊 目的片段上的起始密码子需要去掉吗？还有GUS上的密码子呢？不懂啊 实验小白 对于这块不太清楚呢 求助！

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-02-08 16:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丽姐萍妹

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-08 17:18:45
相当混乱，到底哪个插哪个

GUS后面插目的片段 构建双价载体的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-02-09 23:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
相当混乱，到底哪个插哪个
赞一下 回复此楼
2楼2017-02-08 17:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主应该是想超表达你的基因吧？

前面说用载体gus前后的内切酶切的很乱，可能是你的质粒发生了变化，楼主可以划线纯化质粒，多挑几个菌落提取质粒，做双切看是否有对的。或者从别人或别的课题要这个载体用。

再者，超表达的载体很多，不妨更换载体，避开这个问题，比你慢慢找答案快的多。

还有，一些短的标签是可以放到基因的两端的，gus我还不确定是否可以，因为它确实好大。不知道是否妨碍目的基因的功能。如果放的话，只要保证前面的基因去掉终止密码子，且不会造成后面基因发生移码，不会提前出现终止子便可。

最后，楼主早看看单酶切插入片段的方向是否和启动子是顺着的，反了也不行。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
3楼2017-02-09 01:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wkj5257

新虫 (小有名气)
可能你刚开始就没有分析载体的酶切位点，所以双酶切切出很多条带，如果这样，可以保证GUS后酶切位点为PmL1酶，且为单位点，过表达或沉默基因最好插入GUS前面，插入后面也不是不可以，但是不能够保证基因表达或者沉默，如果GUS前只有一个酶切位点能够选择，那就只能这样了，不用去除GUS终止密码子。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
分子生物学，未来科技的领导者
4楼2017-02-09 01:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭