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karkilin

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白质二聚体问题 sds page 和 native page 已有3人参与

求救各位大神

本人分离的蛋白质在凝胶电泳和native page显示分子量约210 kDa,但是12.5% sds page 显示两条明显条带 约200 kDa和15 kDa,这条15kDa 条带在之前分离过程中一直存在。初步下结论是一个二聚体。

问题是, sds page 显示的两条条带粗细有很大区别,200 kDa的条带很粗,而15 kDa的比较细。编辑提出如果是二聚体,条带粗细应该一样,需要解释这个问题。

请有经验的前辈不吝赐教。
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karkilin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-08 08:39:26
分子量大的肯定会染色深

亲,如果有相关的英文文献报道支持这个观点,请发链接给我感激不尽。根据染色原理 http://www.nature.com/protocolexchange/protocols/617#/figures,支持该观点。
有限的生命探索无穷的世界
5楼2017-02-08 13:38:21
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Fannie_cool

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-08 21:29:18
说的是复合物,不是二聚体吧?一般说,如果是1:1的复合物,那么复合物中较大的一个着色能力要更强一些,何况二者分子量差别显著,在胶图上肯定粗细差别明显。再有一个,单一浓度的胶,分离这两个蛋白不合适,可以考虑使用梯度胶,来平衡胶本身带来的差距。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-02-08 08:38:55
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karkilin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Fannie_cool at 2017-02-08 07:38:55
说的是复合物,不是二聚体吧?一般说,如果是1:1的复合物,那么复合物中较大的一个着色能力要更强一些,何况二者分子量差别显著,在胶图上肯定粗细差别明显。再有一个,单一浓度的胶,分离这两个蛋白不合适,可以考 ...

谢谢您给的建议。我想您说的着色能力是其中原因之一。其实应该跑一个2D电泳或者等电点聚焦电泳来验证一下。另外我推测可能样品不纯,存在两个分子量非常接近的蛋白,其中一个是复合物,由于分子量较大,12.5%的胶分不开,就显示一条条带,应跑个8%的试试。,这样的话,把自己的结论都给推翻了,得重新下结论
有限的生命探索无穷的世界
3楼2017-02-08 08:55:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子量大的肯定会染色深
4楼2017-02-08 09:39:26
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