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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质二聚体问题 sds page 和 native page
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karkilin

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白质二聚体问题 sds page 和 native page 已有3人参与

求救各位大神

本人分离的蛋白质在凝胶电泳和native page显示分子量约210 kDa，但是12.5% sds page 显示两条明显条带 约200 kDa和15 kDa，这条15kDa 条带在之前分离过程中一直存在。初步下结论是一个二聚体。

问题是， sds page 显示的两条条带粗细有很大区别，200 kDa的条带很粗，而15 kDa的比较细。编辑提出如果是二聚体，条带粗细应该一样，需要解释这个问题。

请有经验的前辈不吝赐教。
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有限的生命探索无穷的世界
1楼 2017-02-07 22:53:39
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Fannie_cool

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-08 21:29:18
说的是复合物，不是二聚体吧？一般说，如果是1:1的复合物，那么复合物中较大的一个着色能力要更强一些，何况二者分子量差别显著，在胶图上肯定粗细差别明显。再有一个，单一浓度的胶，分离这两个蛋白不合适，可以考虑使用梯度胶，来平衡胶本身带来的差距。

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2楼2017-02-08 08:38:55
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karkilin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fannie_cool at 2017-02-08 07:38:55
说的是复合物，不是二聚体吧？一般说，如果是1:1的复合物，那么复合物中较大的一个着色能力要更强一些，何况二者分子量差别显著，在胶图上肯定粗细差别明显。再有一个，单一浓度的胶，分离这两个蛋白不合适，可以考 ...

谢谢您给的建议。我想您说的着色能力是其中原因之一。其实应该跑一个2D电泳或者等电点聚焦电泳来验证一下。另外我推测可能样品不纯，存在两个分子量非常接近的蛋白，其中一个是复合物，由于分子量较大，12.5%的胶分不开，就显示一条条带，应跑个8%的试试。，这样的话，把自己的结论都给推翻了，得重新下结论
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有限的生命探索无穷的世界
3楼2017-02-08 08:55:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
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分子量大的肯定会染色深
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4楼2017-02-08 09:39:26
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karkilin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-08 08:39:26
分子量大的肯定会染色深

亲，如果有相关的英文文献报道支持这个观点，请发链接给我感激不尽。根据染色原理 http://www.nature.com/protocolexchange/protocols/617#/figures，支持该观点。
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有限的生命探索无穷的世界
5楼2017-02-08 13:38:21
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思羽001

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以咨询一下你怎么跑的吗
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6楼2017-03-06 14:32:39
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