| 查看: 430 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
酶切、连接求助
|
|||
|
我计划用双酶切我的PCR产物，和pGL3质粒，然后转化大肠杆菌JM109.如果顺利，转染重组质粒进入HepG2细胞。我有如下问题请教大家： （1）酶切之后，是否要用SAP去掉磷酸集团？有的文献说要，但是有的说不用。 （2）酶切的时候，大家一般用多少体系？似乎大部分人都用50-100ul。 （3）连接的时候，PCR产物、pGL质粒比例一般是3-10：1.这个比例是摩尔数比还是DNA总量之比？ （4）HepG2细胞，我看有人用RPMI1640养，有人用DMEM养。不同的培养基，是否会对最终结果有影响？ （5）转染的时候，对细胞数是否有要求？ Thanks！ |
回复此楼» 猜你喜欢
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有21人回复
-
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有7人回复
-
最失望的一年
已经有3人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有19人回复
-
请教限项目规定
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
推荐一本书
已经有13人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
6楼2008-12-15 13:09:48
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-12-15 08:53:00
3楼2008-12-15 10:09:08
richart
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 733.7
- 散金: 2
- 帖子: 493
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 327347
- 注册: 2007-03-18
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2008-12-15 10:56:34