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酶切、连接求助
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我计划用双酶切我的PCR产物，和pGL3质粒，然后转化大肠杆菌JM109.如果顺利，转染重组质粒进入HepG2细胞。我有如下问题请教大家： （1）酶切之后，是否要用SAP去掉磷酸集团？有的文献说要，但是有的说不用。 （2）酶切的时候，大家一般用多少体系？似乎大部分人都用50-100ul。 （3）连接的时候，PCR产物、pGL质粒比例一般是3-10：1.这个比例是摩尔数比还是DNA总量之比？ （4）HepG2细胞，我看有人用RPMI1640养，有人用DMEM养。不同的培养基，是否会对最终结果有影响？ （5）转染的时候，对细胞数是否有要求？ Thanks！ |
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