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miaomiao1

新虫 (小有名气)

[求助] 为何我利用CTAB法提取的DNA总是存在RNA污染,RNA酶加特别多也没用,求指点!

我的具体操作方法是用1ml预热的CTAB溶液(2%)溶解0.1mg大豆粉末样品,65°一小时,后加入10微升RNA酶,37°半小时,离心,取上清加入等体积酚氯仿异戊醇,混合,离心,上清加入等体积氯仿异戊醇,混合,离心,上清加入预冷的异丙醇,离心,70%乙醇洗涤两次。提出的DNA量特别足,加400微升TE,可测得三百多微量/毫升。但260/280普遍在2.1以上,PCR跑胶效果不错,就是260/280这莫高怎么解决?RNA酶量加到50微升依然2.0以上,感觉特别折磨,怎么办?求过来人解答!

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-22 07:51:09
考虑rna酶是否失活了

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

帮助虫友,提升自己
2楼2017-01-22 07:08:17
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miaomiao1

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by charon1982 at 2017-01-22 07:08:17
考虑rna酶是否失活了

嗯嗯,我又尝试了向提取好的DNA中加入RNA酶,又用氯仿异戊醇抽提了一遍,结果这次的DNA纯度较好,没有RNA污染了,我觉得这样看来RNA酶应该没问题,应该是我操作过程存在问题,也许在无菌工作台中操作会更有保证!还是谢谢你的分析!

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3楼2017-01-22 20:16:32
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草溪河

铁虫 (著名写手)

曾有相同的经历,换了各种RNA酶,都无效,最后也是提完DNA后再去的RNA

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4楼2017-01-22 21:13:56
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fuyuhao

新虫 (初入文坛)

请问楼主,预冷的异戊醇中预冷的温度是多少?4℃还是-20度
5楼2018-08-13 20:12:16
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fuyuhao

新虫 (初入文坛)

请问楼主,70%乙醇洗涤是倾倒上清液还是用枪吸取?还有就是风干大约多久,我四个小时都没干,问题在哪里?
6楼2018-08-14 21:07:20
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