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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化已有7人参与

连接转化,最后检测什么都没有,菌落也长了……就是跑带的时候……什么都没有……好多次了……不知道怎么回事……求大神们指教……

连接转化


连接转化-1


@飞约疯人院 @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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yt7777

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-19 07:49:06
可能是pcr时加入的菌液浓度过高,另外楼主的点样孔除了marker都很亮,可能是试剂有污染,,,,最后:制板时已加入抗性前提下,涂板的时候可以再适当加点抗生素,然后加入菌液涂板,阳性概率会得到提升,,,,,以上纯属个人愚见。。。
6楼2017-01-18 00:54:49
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-19 07:50:34
上样孔非常亮,说明基因组DNA浓度很高,就是说你的模板加太多了,之前把浓度降低十倍才行。正常菌落pcr几乎不会在上样孔里看见条带的。

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7楼2017-01-18 01:15:53
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fudan671

木虫 (著名写手)

应该判定没有连入,其次可以增加抗生素浓度。

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8楼2017-01-18 07:26:53
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Rdan

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-17 22:41:45
直接提取质粒,也许会出来?
...

嗯,如果连上了的话。菌液条带不明显也是可能的。但是这种情况只报侥幸心理哦。做分子还是每一步都确保正确比较省事,不然后面太费劲,最终做不走。

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5楼2017-01-17 23:39:36
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shaoxin816

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
17楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-18 20:42:59
没有……师兄说没必要做……就一直没做……
...

对照肯定要做!必须做!你做一次对照,要是backbone对照也长出克隆。说明 没切开

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18楼2017-01-19 21:15:45
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普通回帖

小虫虫fly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-17 21:53:28
连接转化,最后检测什么都没有,菌落也长了……就是跑带的时候……什么都没有……好多次了……不知道怎么回事……求大神们指教……


...

没有连上应该是,之前也遇到过这种情况

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2楼2017-01-17 22:03:18
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Rdan

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-19 07:49:29
菌液pcr没有条带,那大概就没有连上,如果一直这样也可以随机挑两管提质粒试试吧,我之前也这样,发现质粒条带是对的,测序也是对的。至于为什么会这样,我也刚涉足不太清楚

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3楼2017-01-17 22:34:44
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Rdan at 2017-01-17 22:34:44
菌液pcr没有条带,那大概就没有连上,如果一直这样也可以随机挑两管提质粒试试吧,我之前也这样,发现质粒条带是对的,测序也是对的。至于为什么会这样,我也刚涉足不太清楚
...

直接提取质粒,也许会出来?

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4楼2017-01-17 22:41:45
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-19 07:49:55
也有可能是产物不纯,有蛋白缠绕着产物堵在了上样孔,你跑胶的loading buffer里有没有SDS,没有的话可以加一点SDS看看有没有条带跑出来

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-01-18 10:16:45
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 浮笙若梦 at 2017-01-18 10:16:45
也有可能是产物不纯,有蛋白缠绕着产物堵在了上样孔,你跑胶的loading buffer里有没有SDS,没有的话可以加一点SDS看看有没有条带跑出来

嗯,从头做起……试一下吧

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10楼2017-01-18 11:13:11
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