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PCR用试剂盒做做实时荧光PCR阴性总是有污染。。。求助 已有2人参与
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用的HBV试剂盒做标准曲线，阴性总是有抬头，实验室有污染 已经换地方做了，移液枪都拆了用75%乙醇洗过了 不过没有用高压灭菌。阴性抬头很高，Ct值都快赶上3次方了， 实验室紫外也照了 通风有在做，每次做实验最后加样的时候也会换手套。然后拿纯水代替阴性做了一下试了下没有荧光。不知道这个有没有意义。是不是可以排除枪、枪头、交叉或者操作过程中的其他污染？ 新手做pcr没经验很多不懂 求助求助 |
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yuer_2楼2017-01-16 09:20:04
只能尽可能 的避免污染了。3楼2017-01-16 10:10:23
4楼2017-01-16 16:52:12
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多少个重复，确定纯水就没有污染？而不是概率事件？如果是，考虑下是不是提取污染。这个发生率很高。如果是提取发生污染，你换个厂家的试剂盒一样出，可以作为验证。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-01-16 18:07:08
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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6楼2017-01-17 13:07:59
足下客
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
yuer_: 金币+50, ★★★很有帮助 2017-01-18 09:38:34
感谢参与，应助指数 +1
yuer_: 金币+50, ★★★很有帮助 2017-01-18 09:38:34
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1、HBV荧光PCR检测是很容易出现污染的，操作的时候要非常谨慎。而且环境中如果存在污染是很难去除的。估计你的操作也是有问题的。你把阴性血清和高浓度的标准品一起准备，是很容易把阴性血清污染到的。 2、我以前提取核酸，把阳性样本和阴性样本一起提取，有时候阴性样本也会被污染，真的是防不胜防。 3、你们的实验台不用次氯酸纳溶液擦吗？我们实验室出现污染，除了照紫外，要把所有的台面用次氯酸钠擦一遍，然后关上门窗闷一晚上。而且每次实验开始前，我们的台面都要喷上75%的乙醇，擦一遍，再做实验。 4、如果阴性血清一直有抬头，也不排除阴性血清被污染的可能。 |
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7楼2017-01-17 13:49:16
8楼2017-01-17 16:38:26
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10楼2017-01-18 09:29:21