24小时热门版块排行榜    

查看: 1874  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuer_

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR用试剂盒做做实时荧光PCR阴性总是有污染。。。求助 已有2人参与

用的HBV试剂盒做标准曲线,阴性总是有抬头,实验室有污染 已经换地方做了,移液枪都拆了用75%乙醇洗过了 不过没有用高压灭菌。阴性抬头很高,Ct值都快赶上3次方了,
实验室紫外也照了 通风有在做,每次做实验最后加样的时候也会换手套。然后拿纯水代替阴性做了一下试了下没有荧光。不知道这个有没有意义。是不是可以排除枪、枪头、交叉或者操作过程中的其他污染?
新手做pcr没经验很多不懂 求助求助
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer_

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 足下客 at 2017-01-17 13:49:16
1、HBV荧光PCR检测是很容易出现污染的,操作的时候要非常谨慎。而且环境中如果存在污染是很难去除的。估计你的操作也是有问题的。你把阴性血清和高浓度的标准品一起准备,是很容易把阴性血清污染到的。
2、我以前提 ...

谢谢你 不过我这里确实没用次氯酸钠擦拭台面 因为实验室完全不通风,次氯酸钠味道闷一晚上就待不了人了 要好久才能散味道 我现在已经把阴性和阳性标准品完全分开处理和加样了 就这样还是有阴性污染。改天试下你说的次氯酸钠擦拭
13楼2017-01-18 09:36:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
日积月累产物的污染,你可以考虑换个别的厂家的试剂盒做做吧

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-01-16 09:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer_

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2017-01-16 09:20:04
日积月累产物的污染,你可以考虑换个别的厂家的试剂盒做做吧

换试剂盒厂家这个我这里也是不太可能了 只能尽可能 的避免污染了。
还有 能问下我把纯水代替阴性血清来检查枪头、操作污染有意义吗?
3楼2017-01-16 10:10:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer_

新虫 (初入文坛)

今天把阴性血清和纯水与3、4、5、6次方浓度的标准品分开处理,污染有略微减少但还是存在。。。郁闷 求大神
4楼2017-01-16 16:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见