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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR用试剂盒做做实时荧光PCR阴性总是有污染。。。求助
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yuer_

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR用试剂盒做做实时荧光PCR阴性总是有污染。。。求助 已有2人参与

用的HBV试剂盒做标准曲线，阴性总是有抬头，实验室有污染 已经换地方做了，移液枪都拆了用75%乙醇洗过了 不过没有用高压灭菌。阴性抬头很高，Ct值都快赶上3次方了，
实验室紫外也照了 通风有在做，每次做实验最后加样的时候也会换手套。然后拿纯水代替阴性做了一下试了下没有荧光。不知道这个有没有意义。是不是可以排除枪、枪头、交叉或者操作过程中的其他污染？
新手做pcr没经验很多不懂 求助求助
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1楼 2017-01-16 08:53:08
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yuer_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-01-16 18:07:08
多少个重复，确定纯水就没有污染？而不是概率事件？如果是，考虑下是不是提取污染。这个发生率很高。如果是提取发生污染，你换个厂家的试剂盒一样出，可以作为验证。
...

三孔重复 纯水做对照也做了三次试验了，都没有荧光 也不知道是不是纯水和阴性血清差太多
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10楼2017-01-18 09:29:21
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
日积月累产物的污染，你可以考虑换个别的厂家的试剂盒做做吧
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yuer_
2楼2017-01-16 09:20:04
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yuer_

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2017-01-16 09:20:04
日积月累产物的污染，你可以考虑换个别的厂家的试剂盒做做吧

换试剂盒厂家这个我这里也是不太可能了 只能尽可能 的避免污染了。
还有 能问下我把纯水代替阴性血清来检查枪头、操作污染有意义吗？
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3楼2017-01-16 10:10:23
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yuer_

新虫 (初入文坛)
今天把阴性血清和纯水与3、4、5、6次方浓度的标准品分开处理，污染有略微减少但还是存在。。。郁闷 求大神
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4楼2017-01-16 16:52:12
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