应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 6 × His标记蛋白定量
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2093  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1322324659

新虫 (小有名气)

[求助] 6 × His标记蛋白定量 已有1人参与

本人使用真核细胞质粒表达载体表达一个目的蛋白，由于没有一抗可以使用，所以在目的蛋白末端加了6×His，现在需要对这个蛋白进行定量检测，使用WB的话定量结果又不太可信，想用ELISA试剂盒检测，但是找不到His的定量试剂盒。

度娘上只搜到一个半定量的试剂盒，但是看那个试剂盒说明书感觉不靠谱。附上链接：
http://www.genscript.com.cn/prod ... on-and-purification

哪位前辈有用过？给小弟推荐一个吧
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-01-12 22:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
引用回帖:
7楼: Originally posted by 1322324659 at 2017-01-16 09:50:10
载体用的pcDNA3.1(-)，细胞系用293。
问题是无论表达量高低，我都不能用普通的总蛋白测定方法。
因为要进行免疫检测仪器之间检测性能的对比，所以必须用酶免疫方法检测目的蛋白。
之所以插入标记蛋白，并检测标 ...

目的蛋白进行纯化了么？富集一下？
如果一定要用His抗体的话 方法也很简单 His单抗通常是鼠抗 把你要测的蛋白做一个梯度浓度包被 加入His单抗 二抗用羊抗鼠或兔抗鼠（带HRP或者其他标记的），用试剂盒里的已知蛋白做标准对照 如果有带his的已知蛋白标准品就不需要买试剂盒了（随便找个原核载体做个表达纯化一下标签蛋白，不到两个星期就能得到）
赞一下 回复此楼
8楼2017-01-16 12:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
蛋白定量呗？BCA？
难道说表达量特别低？
赞一下 回复此楼
2楼2017-01-13 10:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉好奇怪哈，蛋白质定量干嘛要上一抗或者WB这样的方法呢？蛋白定量自己就很多方法，简单直接，何必那么绕？
赞一下 回复此楼
3楼2017-01-13 14:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-01-13 14:55:40
感觉好奇怪哈，蛋白质定量干嘛要上一抗或者WB这样的方法呢？蛋白定量自己就很多方法，简单直接，何必那么绕？

不是普通的蛋白，没法纯化。
不是那种双缩脲法能随便计算的
赞一下 回复此楼
4楼2017-01-13 22:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 130+4 Yishengeryi 2026-03-30 4/200 2026-03-31 19:52 by babero
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +3 hyz0119 2026-03-31 3/150 2026-03-31 18:31 by 1939136013狗壮
[考研] 311求调剂 +7 李芷新1 2026-03-31 7/350 2026-03-31 18:10 by 无际的草原
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +11 秋二十二 2026-03-30 11/550 2026-03-31 18:09 by 253863592
[考研] 085600，321分求调剂 +7 大馋小子 2026-03-31 7/350 2026-03-31 18:02 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 生医工0831调剂求推荐 +4 小熊睿睿_s 2026-03-27 6/300 2026-03-31 17:12 by 记事本2026
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +12 nnnnnnn5 2026-03-25 12/600 2026-03-31 16:21 by 记事本2026
[考研] 289求调剂 +3 Acesczlo 2026-03-29 4/200 2026-03-31 14:48 by 热情沙漠
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭