应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 6 × His标记蛋白定量
91/1返回列表
查看: 2371  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1322324659

新虫 (小有名气)

[求助] 6 × His标记蛋白定量 已有1人参与

本人使用真核细胞质粒表达载体表达一个目的蛋白，由于没有一抗可以使用，所以在目的蛋白末端加了6×His，现在需要对这个蛋白进行定量检测，使用WB的话定量结果又不太可信，想用ELISA试剂盒检测，但是找不到His的定量试剂盒。

度娘上只搜到一个半定量的试剂盒，但是看那个试剂盒说明书感觉不靠谱。附上链接：
http://www.genscript.com.cn/prod ... on-and-purification

哪位前辈有用过？给小弟推荐一个吧
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-01-12 22:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
蛋白定量呗？BCA？
难道说表达量特别低？
赞一下 回复此楼
2楼2017-01-13 10:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉好奇怪哈，蛋白质定量干嘛要上一抗或者WB这样的方法呢？蛋白定量自己就很多方法，简单直接，何必那么绕？
赞一下 回复此楼
3楼2017-01-13 14:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-01-13 14:55:40
感觉好奇怪哈，蛋白质定量干嘛要上一抗或者WB这样的方法呢？蛋白定量自己就很多方法，简单直接，何必那么绕？

不是普通的蛋白，没法纯化。
不是那种双缩脲法能随便计算的
赞一下 回复此楼
4楼2017-01-13 22:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bush119 at 2017-01-13 10:05:28
蛋白定量呗？BCA？
难道说表达量特别低？

表达量确实比较低，单位需要计算成 IU/ml。
赞一下 回复此楼
5楼2017-01-13 22:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1322324659 at 2017-01-13 22:08:42
表达量确实比较低，单位需要计算成 IU/ml。...

是不是转染效率低 或者细胞株有关？
异源表达载体用的什么？
通常强启动子不会表达量这么低的
赞一下 回复此楼
6楼2017-01-16 08:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bush119 at 2017-01-16 08:19:54
是不是转染效率低 或者细胞株有关？
异源表达载体用的什么？
通常强启动子不会表达量这么低的...

载体用的pcDNA3.1(-)，细胞系用293。
问题是无论表达量高低，我都不能用普通的总蛋白测定方法。
因为要进行免疫检测仪器之间检测性能的对比，所以必须用酶免疫方法检测目的蛋白。
之所以插入标记蛋白，并检测标记蛋白，就是为了以插入蛋白的检测结果作为不同仪器之间的统一标准。
赞一下 回复此楼
7楼2017-01-16 09:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
引用回帖:
7楼: Originally posted by 1322324659 at 2017-01-16 09:50:10
载体用的pcDNA3.1(-)，细胞系用293。
问题是无论表达量高低，我都不能用普通的总蛋白测定方法。
因为要进行免疫检测仪器之间检测性能的对比，所以必须用酶免疫方法检测目的蛋白。
之所以插入标记蛋白，并检测标 ...

目的蛋白进行纯化了么？富集一下？
如果一定要用His抗体的话 方法也很简单 His单抗通常是鼠抗 把你要测的蛋白做一个梯度浓度包被 加入His单抗 二抗用羊抗鼠或兔抗鼠（带HRP或者其他标记的），用试剂盒里的已知蛋白做标准对照 如果有带his的已知蛋白标准品就不需要买试剂盒了（随便找个原核载体做个表达纯化一下标签蛋白，不到两个星期就能得到）
赞一下 回复此楼
8楼2017-01-16 12:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayeruu016
9楼2017-08-21 08:20:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1322324659 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-02 06:39 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 10/500 2026-11-02 06:16 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-02 06:07 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 13/650 2026-11-02 06:03 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 06:00 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 9/450 2026-11-02 05:54 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 05:50 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 18/900 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 16:52 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 3/150 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭