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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

[求助] pcr后电泳异常,求助大神分析可能原因已有6人参与

从质粒上扩目的片段,50微体系,加了2微质粒模版。结果跑出来一大片亮,还不是条带弥散那种

pcr后电泳异常,求助大神分析可能原因


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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-01-09 21:14:11
我觉得你还是先把上样量先减少点,浓度太高,而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好,再调整看看,至少可以看到正常的条带形状,祝好

上样量还是模版量呢

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3楼2017-01-09 21:19:47
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 21:25:16
1,拍照时曝光没调好,建议下次调整好相关参数。
2,质粒浓度太大了,酶切的话最好控制在5u以内。

不是酶切是pcr呢

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5楼2017-01-09 21:56:41
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Ailee桑卡娜

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6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

你平时做都只上2到5的量?我们实验室都用10到50微呢

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7楼2017-01-10 10:35:05
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引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

谢谢,我这次用了1微模版试试

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8楼2017-01-10 10:35:28
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Ailee桑卡娜

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13楼: Originally posted by 饶辽源 at 2017-01-11 13:11:20
胶的问题可能性比较大

已经发现原因了呢,是模版加太多了

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15楼2017-01-11 20:39:53
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Ailee桑卡娜

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引用回帖:
10楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-11 12:34:22
2 μg的质粒还是比较亮滴,不过还是第一次见过成片的亮光,分明是你曝光过度

调了一下也很亮,是模版加多,已经好了呢

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16楼2017-01-11 20:40:38
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Ailee桑卡娜

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12楼: Originally posted by ykxyer at 2017-01-11 12:56:47
祝福楼主

谢谢,已经好了呢

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17楼2017-01-11 20:40:55
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Ailee桑卡娜

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14楼: Originally posted by chen5805 at 2017-01-11 13:22:32
你这种情况还是第一次见到,你的marker条带也不怎么清晰,质粒做模板0.5-1ul,你也可以先用小胶检测结果后,再做纯化回收

marker不亮是什么原因呢?

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18楼2017-01-11 20:41:27
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