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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr后电泳异常，求助大神分析可能原因
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

[求助] pcr后电泳异常，求助大神分析可能原因已有6人参与

从质粒上扩目的片段，50微体系，加了2微质粒模版。结果跑出来一大片亮，还不是条带弥散那种

pcr后电泳异常，求助大神分析可能原因


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1楼2017-01-09 20:57:43
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-01-09 21:14:11
我觉得你还是先把上样量先减少点，浓度太高，而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好，再调整看看，至少可以看到正常的条带形状，祝好

上样量还是模版量呢

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3楼2017-01-09 21:19:47
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 21:25:16
1，拍照时曝光没调好，建议下次调整好相关参数。
2，质粒浓度太大了，酶切的话最好控制在5u以内。

不是酶切是pcr呢

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5楼2017-01-09 21:56:41
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

你平时做都只上2到5的量？我们实验室都用10到50微呢

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7楼2017-01-10 10:35:05
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Ailee桑卡娜

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6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

谢谢，我这次用了1微模版试试

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8楼2017-01-10 10:35:28
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Ailee桑卡娜

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13楼: Originally posted by 饶辽源 at 2017-01-11 13:11:20
胶的问题可能性比较大

已经发现原因了呢，是模版加太多了

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15楼2017-01-11 20:39:53
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-11 12:34:22
2 μg的质粒还是比较亮滴，不过还是第一次见过成片的亮光，分明是你曝光过度

调了一下也很亮，是模版加多，已经好了呢

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16楼2017-01-11 20:40:38
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by ykxyer at 2017-01-11 12:56:47
祝福楼主

谢谢，已经好了呢

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17楼2017-01-11 20:40:55
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by chen5805 at 2017-01-11 13:22:32
你这种情况还是第一次见到，你的marker条带也不怎么清晰，质粒做模板0.5-1ul,你也可以先用小胶检测结果后，再做纯化回收

marker不亮是什么原因呢？

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18楼2017-01-11 20:41:27
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