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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

[求助] pcr后电泳异常，求助大神分析可能原因 已有6人参与

从质粒上扩目的片段，50微体系，加了2微质粒模版。结果跑出来一大片亮，还不是条带弥散那种

pcr后电泳异常，求助大神分析可能原因


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1楼 2017-01-09 20:57:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

谢谢，我这次用了1微模版试试

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8楼2017-01-10 10:35:28
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-10 07:44:17
我觉得你还是先把上样量先减少点，浓度太高，而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好，再调整看看，至少可以看到正常的条带形状，祝好

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2017-01-09 21:14:11
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-01-09 21:14:11
我觉得你还是先把上样量先减少点，浓度太高，而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好，再调整看看，至少可以看到正常的条带形状，祝好

上样量还是模版量呢

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3楼2017-01-09 21:19:47
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-10 07:44:35
1，拍照时曝光没调好，建议下次调整好相关参数。
2，质粒浓度太大了，酶切的话最好控制在5u以内。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
4楼2017-01-09 21:25:16
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 21:25:16
1，拍照时曝光没调好，建议下次调整好相关参数。
2，质粒浓度太大了，酶切的话最好控制在5u以内。

不是酶切是pcr呢

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5楼2017-01-09 21:56:41
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Ailee桑卡娜 at 2017-01-09 21:56:41
不是酶切是pcr呢
...

2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右
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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
6楼2017-01-09 22:08:18
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

你平时做都只上2到5的量？我们实验室都用10到50微呢

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7楼2017-01-10 10:35:05
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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引用回帖:
7楼: Originally posted by Ailee桑卡娜 at 2017-01-10 10:35:05
你平时做都只上2到5的量？我们实验室都用10到50微呢
...

是的啊。质粒浓度那么大，10ul太大了。我们最多点3ul
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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
9楼2017-01-10 10:39:48
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-12 07:45:28
2 μg的质粒还是比较亮滴，不过还是第一次见过成片的亮光，分明是你曝光过度
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10楼2017-01-11 12:34:22
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