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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

[求助] pcr后电泳异常,求助大神分析可能原因 已有6人参与

从质粒上扩目的片段,50微体系,加了2微质粒模版。结果跑出来一大片亮,还不是条带弥散那种

pcr后电泳异常,求助大神分析可能原因


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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

谢谢,我这次用了1微模版试试

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8楼2017-01-10 10:35:28
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普通回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-10 07:44:17
我觉得你还是先把上样量先减少点,浓度太高,而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好,再调整看看,至少可以看到正常的条带形状,祝好

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2017-01-09 21:14:11
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-01-09 21:14:11
我觉得你还是先把上样量先减少点,浓度太高,而且拍照是的曝光度亮度等参数没调好,再调整看看,至少可以看到正常的条带形状,祝好

上样量还是模版量呢

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3楼2017-01-09 21:19:47
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-10 07:44:35
1,拍照时曝光没调好,建议下次调整好相关参数。
2,质粒浓度太大了,酶切的话最好控制在5u以内。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
4楼2017-01-09 21:25:16
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 21:25:16
1,拍照时曝光没调好,建议下次调整好相关参数。
2,质粒浓度太大了,酶切的话最好控制在5u以内。

不是酶切是pcr呢

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5楼2017-01-09 21:56:41
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Ailee桑卡娜 at 2017-01-09 21:56:41
不是酶切是pcr呢
...

2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
6楼2017-01-09 22:08:18
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-09 22:08:18
2ul 质粒做模板太多了。一般0.5-1就可以了。质粒PCR很好做的。还有电泳是上样不要太多。一般2-5ul左右...

你平时做都只上2到5的量?我们实验室都用10到50微呢

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7楼2017-01-10 10:35:05
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

引用回帖:
7楼: Originally posted by Ailee桑卡娜 at 2017-01-10 10:35:05
你平时做都只上2到5的量?我们实验室都用10到50微呢
...

是的啊。质粒浓度那么大,10ul太大了。我们最多点3ul
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
9楼2017-01-10 10:39:48
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-12 07:45:28
2 μg的质粒还是比较亮滴,不过还是第一次见过成片的亮光,分明是你曝光过度
10楼2017-01-11 12:34:22
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