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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » nanodrop测蛋白（葡萄糖氧化酶）浓度求助
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accumulate03

新虫 (著名写手)

[求助] nanodrop测蛋白（葡萄糖氧化酶）浓度求助 已有4人参与

本人新手，实验室刚买回来一台nanodrop。想用它测葡萄糖氧化酶也就是蛋白质的浓度。但是仪器测蛋白A280，没有我测的程序。如果测的话，需要知道葡萄糖氧化酶的摩尔消光系数。

不知道有没有同学用过这种仪器，测过系统未设定蛋白的浓度？葡萄糖氧化酶的摩尔吸光系数如何找到？希望懂得同学给予帮助，谢谢啦。

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1楼 2017-01-08 19:37:37
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-14 21:37:15
每种蛋白氨基酸组成不一样，导致其在UV280光吸收的值差异很大，有一个系数的。根据你自己的蛋白序列可以去搜索，找到这个系数。再通过你测的值去除。我遇到的蛋白，有些系数是2.5，那你测得数值2.5才约1mg的浓度，有些系数0.2，测得值为0.4的话，应该就有2mg的浓度了
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11楼2017-01-13 14:53:12
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-14 21:37:32
A280测浓度的前提是，首先你的蛋白纯度要高，其次溶剂中不能有干扰物质（可以百度）。然后你要知道你蛋白的序列。之后将序列复制到下面网址中就可以计算出蛋白0.1%的质量消光系数。在nanoDrop上要选择输入消光系数的测量模式（不要选1mg=1的模式），应该是要输入1%的质量消光系数（0.1%的数值乘以10就行），这样测出来才比较准。
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
12楼2017-01-14 20:38:54
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-14 20:38:54
A280测浓度的前提是，首先你的蛋白纯度要高，其次溶剂中不能有干扰物质（可以百度）。然后你要知道你蛋白的序列。之后将序列复制到下面网址中就可以计算出蛋白0.1%的质量消光系数。在nanoDrop上要选择输入消光系数的 ...

不好意思，忘了贴网址了
http://web.expasy.org/protparam/
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
13楼2017-01-14 21:11:46
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heylixing

铁虫 (正式写手)
消光系数用这个网站预测http://web.expasy.org/protparam/ ... 97793916.1485817843

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15楼2017-01-31 07:17:23
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
放弃吧，紫外线吸光度测蛋白浓度非常不准。
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2楼2017-01-11 12:43:50
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一直没有测过蛋白~我感觉蛋白浓度还是经典的方法靠谱
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···
3楼2017-01-11 12:47:33
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accumulate03

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-11 12:43:50
放弃吧，紫外线吸光度测蛋白浓度非常不准。

没有想过有多么准确，大概估算就行

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4楼2017-01-11 15:17:29
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accumulate03

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2017-01-11 12:47:33
一直没有测过蛋白~我感觉蛋白浓度还是经典的方法靠谱

谢谢啦

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5楼2017-01-11 15:17:38
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匿名

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accumulate03
6楼2017-01-13 07:09:08
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匿名

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:36:44
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7楼2017-01-13 09:57:05
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accumulate03

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dgpag at 2017-01-13 09:57:05
然后知道mg/ml 的浓度后，上pubmed 搜此蛋白的序列即可知道分子量，然后换算成摩尔浓度就可以了。

你好，谢谢帮助。吸光度和质量浓度还是摩尔浓度成正比？我用的是质量浓度，用nanodrop进行紫外—可见全光谱扫描

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8楼2017-01-13 13:41:37
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accumulate03

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引用回帖:
6楼: Originally posted by dgpag at 2017-01-13 07:09:08
一般吸光度和mg/ml是1比1的关系

谢谢答复，感觉貌似我用质量浓度测下来不是1:1，不知道为什么？

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9楼2017-01-13 13:44:28
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匿名

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-13 21:20:35
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10楼2017-01-13 14:10:31
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