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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » nanodrop测蛋白（葡萄糖氧化酶）浓度求助
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-14 21:37:15
每种蛋白氨基酸组成不一样，导致其在UV280光吸收的值差异很大，有一个系数的。根据你自己的蛋白序列可以去搜索，找到这个系数。再通过你测的值去除。我遇到的蛋白，有些系数是2.5，那你测得数值2.5才约1mg的浓度，有些系数0.2，测得值为0.4的话，应该就有2mg的浓度了
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11楼2017-01-13 14:53:12
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-14 21:37:32
A280测浓度的前提是，首先你的蛋白纯度要高，其次溶剂中不能有干扰物质（可以百度）。然后你要知道你蛋白的序列。之后将序列复制到下面网址中就可以计算出蛋白0.1%的质量消光系数。在nanoDrop上要选择输入消光系数的测量模式（不要选1mg=1的模式），应该是要输入1%的质量消光系数（0.1%的数值乘以10就行），这样测出来才比较准。
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
12楼2017-01-14 20:38:54
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-14 20:38:54
A280测浓度的前提是，首先你的蛋白纯度要高，其次溶剂中不能有干扰物质（可以百度）。然后你要知道你蛋白的序列。之后将序列复制到下面网址中就可以计算出蛋白0.1%的质量消光系数。在nanoDrop上要选择输入消光系数的 ...

不好意思，忘了贴网址了
http://web.expasy.org/protparam/
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
13楼2017-01-14 21:11:46
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heylixing

铁虫 (正式写手)
你看下A260/280的比值，在0.5-0.6之间。xi'ao

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14楼2017-01-31 07:16:48
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heylixing

铁虫 (正式写手)
消光系数用这个网站预测http://web.expasy.org/protparam/ ... 97793916.1485817843

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15楼2017-01-31 07:17:23
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BIOTITAN2009

金虫 (小有名气)
摩尔吸光系数可以在expasy中的ProtParam中得到，输入你的蛋白氨基酸序列，可以自动计算。网址: http://web.expasy.org/protparam/ ... 17573811.1485959499
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Ignorance is infinite.
16楼2017-02-01 22:33:42
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