应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 反转录后发现扩增的cDNA含内含子
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 3246  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

winehappyue

新虫 (初入文坛)

[交流] 反转录后发现扩增的cDNA含内含子 已有5人参与

求各位大神帮忙！！！

反转录PCR后，发现目的条带中含有一段100bp左右的内含子序列！
现怀疑是提RNA时DNA没有消化完全。

求问是否可以在得到的RNA中直接加入DNA消化酶，再反转？如果可以，有推荐的产品么，加入量是多少？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-12-30 17:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君恋多

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2016-12-30 22:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winehappyue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 君恋多 at 2016-12-30 22:38:06
可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？
赞一下 回复此楼
3楼2017-01-02 10:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君恋多

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by winehappyue at 2017-01-02 10:16:14
谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？...

一般不用吧，里面应该也没有多少基因组。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-01-02 10:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君恋多

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by winehappyue at 2017-01-02 10:16:14
谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？...

另外，消化完后，抽提的时候要在体系里面补几百微升的无rna酶的灭菌双蒸水。
还要注意保持低温，不要让rna降解了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-01-02 10:57:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，有几个问题想要请教一下。我们最近想提取一个真核的基因，看看能不能在大肠杆菌里表达获得有活性的蛋白。做的时候大致步骤就是先提取真核生物的总RNA，之后用试剂盒里的通用引物进行发转录获得cDNA，在用cDNA为模板，目的基因上下游引物pcr的时候发现片段都在500bp以下（目的片段1500bp左右），请问这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
···
6楼2017-02-21 19:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2017-02-21 22:11:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

winyuyuyu123

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，你做RT用的是什么，有的RT试剂盒里面直接包含DNase的，有的没有；没有的话就需要自行消解，一般用RQ1即可。你可以将自己的RNA先跑个电泳，上样量300ng即可，看看有没有明显的基因组条带。
自行用RQ1消解的话，可以先将你所有的样品都拿来消解，然后纯化，然后取1-2μg做RT；也可以直接取1-2μg做消解，然后把消解产物直接RT。
最后提醒一点，确定你的序列信息，包含内含子的具体情况是什么样的，是不是有可能发生的As事件，如果是，没准又可以出一篇文章。。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-02-22 09:43:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2220360280

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2017-02-22 09:43:35
首先，你做RT用的是什么，有的RT试剂盒里面直接包含DNase的，有的没有；没有的话就需要自行消解，一般用RQ1即可。你可以将自己的RNA先跑个电泳，上样量300ng即可，看看有没有明显的基因组条带。
自行用RQ1消解的话 ...

确定内含子的方法除了比对DNA与CDNA以外，还有什么其他的方法可以预测内含子数目，其他的一些结合位点的信息。
赞一下 回复此楼
天才是90%的努力加1%的灵感，最后坚持为9%，这为成功定律！
9楼2017-04-21 18:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 winehappyue 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +4 hanamiko 2026-03-27 4/200 2026-03-28 04:16 by fmesaito
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +10 路痴小琪 2026-03-27 10/500 2026-03-28 03:36 by fmesaito
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 322求调剂 +4 旧吢 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:38 by 不吃魚的貓
[考研] 0856调剂 +5 求求让我有书读� 2026-03-26 6/300 2026-03-27 15:12 by caszguilin
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:52 by 醉在风里
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求调剂 +4 0857求调剂. 2026-03-24 4/200 2026-03-27 14:03 by 静静静静静静静�
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭