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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 反转录后发现扩增的cDNA含内含子
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winehappyue

新虫 (初入文坛)

[交流] 反转录后发现扩增的cDNA含内含子 已有5人参与

求各位大神帮忙！！！

反转录PCR后，发现目的条带中含有一段100bp左右的内含子序列！
现怀疑是提RNA时DNA没有消化完全。

求问是否可以在得到的RNA中直接加入DNA消化酶，再反转？如果可以，有推荐的产品么，加入量是多少？
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1楼 2016-12-30 17:19:20
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winehappyue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 君恋多 at 2016-12-30 22:38:06
可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？
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3楼2017-01-02 10:16:14
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君恋多

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可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

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2楼2016-12-30 22:38:06
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君恋多

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by winehappyue at 2017-01-02 10:16:14
谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？...

一般不用吧，里面应该也没有多少基因组。

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4楼2017-01-02 10:53:47
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君恋多

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by winehappyue at 2017-01-02 10:16:14
谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？...

另外，消化完后，抽提的时候要在体系里面补几百微升的无rna酶的灭菌双蒸水。
还要注意保持低温，不要让rna降解了。

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5楼2017-01-02 10:57:50
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