应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 反转录后发现扩增的cDNA含内含子
51/1返回列表
查看: 3555  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

winehappyue

新虫 (初入文坛)

[交流] 反转录后发现扩增的cDNA含内含子 已有5人参与

求各位大神帮忙！！！

反转录PCR后，发现目的条带中含有一段100bp左右的内含子序列！
现怀疑是提RNA时DNA没有消化完全。

求问是否可以在得到的RNA中直接加入DNA消化酶，再反转？如果可以，有推荐的产品么，加入量是多少？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-12-30 17:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，有几个问题想要请教一下。我们最近想提取一个真核的基因，看看能不能在大肠杆菌里表达获得有活性的蛋白。做的时候大致步骤就是先提取真核生物的总RNA，之后用试剂盒里的通用引物进行发转录获得cDNA，在用cDNA为模板，目的基因上下游引物pcr的时候发现片段都在500bp以下（目的片段1500bp左右），请问这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
···
6楼2017-02-21 19:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

君恋多

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2016-12-30 22:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winehappyue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 君恋多 at 2016-12-30 22:38:06
可以，但是消化完基因组DNA后，还要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，盐离子等等。用dna酶I，具体用量看说明书就行了。

谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？
赞一下 回复此楼
3楼2017-01-02 10:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君恋多

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by winehappyue at 2017-01-02 10:16:14
谢谢，明白了。我去做一下试试，不过，你说我酶的浓度提高一下行不？...

一般不用吧，里面应该也没有多少基因组。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-01-02 10:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:14 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 4/200 2026-11-15 09:57 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 6/300 2026-11-15 02:59 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 9/450 2026-11-15 02:04 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-15 00:27 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-13 11:37 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-13 11:08 by Equinoxhua
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:25 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:25 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭