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lightdream新虫 (小有名气)
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新手，定量PCR出现下列问题，完全不懂，求大神帮忙！ 已有4人参与
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预实验，跑了目的基因和内参基因。用的SYBR-Green，设置35个cycles，看熔解曲线还可以，但是为什么目的基因的平台期没有出来，只有Ct值。这是怎么回事呀。。。 跑的20ul体系，cDNA， SYBR-Green， （上下游）引物的比例1：2：1，即5ul ，10ul， 5ul。今天设置了40个循环又跑了一次，但是还是没到平台期。 20161223扩增曲线.jpg  20161223熔解曲线.jpg |
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15楼2017-01-05 09:00:10
peitaokong
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3楼2016-12-29 16:33:10
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5楼2017-01-03 16:11:51
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6楼2017-01-03 16:12:36
lightdream8楼2017-01-03 20:56:24
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17楼2017-01-05 09:57:56
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2楼2016-12-29 16:16:43
4楼2016-12-29 21:52:52
peitaokong
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-05 07:39:50
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如果是表达丰度很高的基因你可以设置为35循环没有问题，如果是表达丰度不是很高的，建议你下次再做可以把循环数调为40个循环。我们一般也是调为40个循环，实际上曲线能够出来，就可以了，至于最后到底有没有能够扩到平台期，对整个数据的分析其实影响不大。 |
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7楼2017-01-03 17:39:36
lightdream
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10楼2017-01-05 01:11:57
