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lightdream

新虫 (小有名气)

[求助] 新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙!已有4人参与

预实验,跑了目的基因和内参基因。用的SYBR-Green,设置35个cycles,看熔解曲线还可以,但是为什么目的基因的平台期没有出来,只有Ct值。这是怎么回事呀。。。 跑的20ul体系,cDNA, SYBR-Green, (上下游)引物的比例1:2:1,即5ul ,10ul, 5ul。今天设置了40个循环又跑了一次,但是还是没到平台期。

新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙!
20161223扩增曲线.jpg


新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙!-1
20161223熔解曲线.jpg
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lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-12-29 21:52:52
循环数不够,后期的扩增曲线就没有了。

仪器倒是已经计算出了Cq值,这样没到平台期对定量有影响吗?
大家交流交流吧~
6楼2017-01-03 16:12:36
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-30 07:43:00
你可以把你的图像参数修改一下,把X轴和Y轴的显示范围调大一些看看,我觉得你的扩增曲线是没有什么问题的,不用担心。
3楼2016-12-29 16:33:10
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
循环数不够,后期的扩增曲线就没有了。
4楼2016-12-29 21:52:52
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lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 16:33:10
你可以把你的图像参数修改一下,把X轴和Y轴的显示范围调大一些看看,我觉得你的扩增曲线是没有什么问题的,不用担心。

可是设置了跑多少个循环X轴就到多少呀。。。
大家交流交流吧~
5楼2017-01-03 16:11:51
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