24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1681  |  回复: 24

lightdream

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2017-01-03 20:56:24
一般没有影响,不过最好是把循环数调到40-45之间,这样可以看到平台期的。...

请问你平时的引物终浓度是多少呀。我的是2.5uM

发自小木虫IOS客户端
大家交流交流吧~
11楼2017-01-05 01:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-03 17:39:36
如果是表达丰度很高的基因你可以设置为35循环没有问题,如果是表达丰度不是很高的,建议你下次再做可以把循环数调为40个循环。我们一般也是调为40个循环,实际上曲线能够出来,就可以了,至于最后到底有没有能够扩 ...

请问你平时的引物终浓度是多少呀。我的是2.5uM

发自小木虫IOS客户端
大家交流交流吧~
12楼2017-01-05 01:15:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by lightdream at 2017-01-05 01:15:51
请问你平时的引物终浓度是多少呀。我的是2.5uM
...

我平时引物都是稀释到5p或者10p的混合引物,20μL定量pcr的体系就加1μL的混合引物。
13楼2017-01-05 08:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-05 08:27:06
我平时引物都是稀释到5p或者10p的混合引物,20μL定量pcr的体系就加1μL的混合引物。...

我也是稀释了十倍之后的上下游混和引物,但是20ul的体系里我能加到5ul
大家交流交流吧~
14楼2017-01-05 08:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们研究的是指数期,扩增曲线正常,有明显指数期就行了,有时候基因丰度低看不到平台期,没有平台期不要紧的
15楼2017-01-05 09:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by lightdream at 2017-01-05 08:35:48
我也是稀释了十倍之后的上下游混和引物,但是20ul的体系里我能加到5ul...

如果你是10p的引物,加5μL没有必要的。1μL就足够了。
16楼2017-01-05 09:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjqhades

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

17楼2017-01-05 09:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yjqhades at 2017-01-05 09:57:56
引物加太多了,cDNA也多。如果引物是工作液(10 uM的话,加0.5就够了)
cDNA  2ul
Primer-F 1ul
Primer-R 1ul
Mix 10 ul
剩下的加水
循环数增加到40

之前的师姐就是这么教的,是不是试剂盒不一样比例就不一样呢?我用的是roche的SYBR-Green。
大家交流交流吧~
18楼2017-01-05 10:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yjqhades at 2017-01-05 09:57:56
引物加太多了,cDNA也多。如果引物是工作液(10 uM的话,加0.5就够了)
cDNA  2ul
Primer-F 1ul
Primer-R 1ul
Mix 10 ul
剩下的加水
循环数增加到40

请问你的意思就是cDNA 2ul, 上下游引物2ul ,SYBR-Green 10ul,水6ul,对吗?
大家交流交流吧~
19楼2017-01-05 10:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 浮笙若梦 at 2017-01-05 09:00:10
我们研究的是指数期,扩增曲线正常,有明显指数期就行了,有时候基因丰度低看不到平台期,没有平台期不要紧的

但是从我这个扩增曲线来看,只露了一点点头,完全不知道是正常还是不正常啊。。。。
大家交流交流吧~
20楼2017-01-05 10:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lightdream 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料科学与工程调剂 +18 深V宿舍吧 2026-03-30 19/950 2026-04-02 10:28 by sanrepian
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 调剂推荐 +10 清酒714 2026-03-26 12/600 2026-04-02 07:57 by 尚水阁主
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 279求调剂 +7 莫xiao 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:05 by 客尔美德
[考研] 085600,320分求调剂 +5 大馋小子 2026-04-01 6/300 2026-04-01 19:40 by 唐沐儿
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +18 Youth_ 2026-03-30 18/900 2026-04-01 19:23 by 无际的草原
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 309求调剂 +19 谁不是少年 2026-03-29 19/950 2026-04-01 15:47 by jp9609
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
[考研] 349求调剂 +6 zwjjjjjj 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:16 by JourneyLucky
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk¥
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
[考研] 0856 335分 +9 cccchenso 2026-03-29 9/450 2026-03-31 16:37 by lishahe
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
信息提示
请填处理意见