| 查看: 1769 | 回复: 5 | ||
winter121木虫 (小有名气)
|
[求助]
实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常，求助解决 已有2人参与
|
目前的情况是用的仪器ABI 7500 FAST，SYBR做相对定量。做了几板实验，都是目的基因挺好，内参不好。内参基因还有目的基因的引物都是文献中找的。引物合成公司建议降低退火温度跑胶试试，结果，PCR跑胶后一个基因也跑不出来，但是实时荧光定量PCR最起码目的基因的峰很好啊。求大神帮忙分析下原因在哪里。溶解曲线图见附件。 内参0-1.png  1内参的溶解曲线.png  内参基因1.png |
回复此楼» 猜你喜欢
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有248人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
-
金色抗生素单硫酸卡那霉素的物化性质、制备与前景
已经有0人回复
-
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
peitaokong
银虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 619.5
- 散金: 12
- 红花: 13
- 帖子: 192
- 在线: 55小时
- 虫号: 1961265
- 注册: 2012-08-29
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-27 07:27:08
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-27 07:27:08
|
溶解曲线一般是单峰，代表着引物是特异性扩增。看着Tm值还算正常，在85℃左右。但是有双峰，就代表着非特异扩增。 出现这种情况有三方面原因，一方面是RNA提取过程中乙醇等有机试剂没有晾干，受有机试剂干扰，影响cDNA质量 第二个方面，引物的原因。第三方面，试剂不太好。一般定量的温度是60℃退火，不知道你的设置是多少，还有你用的是什么试剂进行试验的。可以选择改变退火温度，重新设计引物，换更好的试剂。从几个方面看看怎么更好的改善。一般特异性不好，应该增加退火温度而不是降低。 |
2楼2016-12-26 21:13:27
winter121
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2102
- 散金: 20
- 帖子: 144
- 在线: 60.8小时
- 虫号: 1963342
- 注册: 2012-08-30
- 性别: MM
- 专业: 污染生态化学
3楼2016-12-27 19:27:17
peitaokong
银虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 619.5
- 散金: 12
- 红花: 13
- 帖子: 192
- 在线: 55小时
- 虫号: 1961265
- 注册: 2012-08-29
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
4楼2016-12-27 19:58:09
5楼2016-12-28 14:04:41
winter121
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2102
- 散金: 20
- 帖子: 144
- 在线: 60.8小时
- 虫号: 1963342
- 注册: 2012-08-30
- 性别: MM
- 专业: 污染生态化学
6楼2016-12-28 20:10:42