| 查看: 1585 | 回复: 5 | ||
winter121木虫 (小有名气)
|
[求助]
实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常，求助解决已有2人参与
|
目前的情况是用的仪器ABI 7500 FAST，SYBR做相对定量。做了几板实验，都是目的基因挺好，内参不好。内参基因还有目的基因的引物都是文献中找的。引物合成公司建议降低退火温度跑胶试试，结果，PCR跑胶后一个基因也跑不出来，但是实时荧光定量PCR最起码目的基因的峰很好啊。求大神帮忙分析下原因在哪里。溶解曲线图见附件。 内参0-1.png  1内参的溶解曲线.png  内参基因1.png |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有179人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
peitaokong
银虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 619.5
- 散金: 12
- 红花: 13
- 帖子: 192
- 在线: 55小时
- 虫号: 1961265
- 注册: 2012-08-29
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-27 07:27:08
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-27 07:27:08
|
溶解曲线一般是单峰，代表着引物是特异性扩增。看着Tm值还算正常，在85℃左右。但是有双峰，就代表着非特异扩增。 出现这种情况有三方面原因，一方面是RNA提取过程中乙醇等有机试剂没有晾干，受有机试剂干扰，影响cDNA质量 第二个方面，引物的原因。第三方面，试剂不太好。一般定量的温度是60℃退火，不知道你的设置是多少，还有你用的是什么试剂进行试验的。可以选择改变退火温度，重新设计引物，换更好的试剂。从几个方面看看怎么更好的改善。一般特异性不好，应该增加退火温度而不是降低。 |
2楼2016-12-26 21:13:27
winter121
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2101
- 散金: 20
- 帖子: 144
- 在线: 60.8小时
- 虫号: 1963342
- 注册: 2012-08-30
- 性别: MM
- 专业: 污染生态化学
3楼2016-12-27 19:27:17
peitaokong
银虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 619.5
- 散金: 12
- 红花: 13
- 帖子: 192
- 在线: 55小时
- 虫号: 1961265
- 注册: 2012-08-29
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
4楼2016-12-27 19:58:09
5楼2016-12-28 14:04:41
winter121
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2101
- 散金: 20
- 帖子: 144
- 在线: 60.8小时
- 虫号: 1963342
- 注册: 2012-08-30
- 性别: MM
- 专业: 污染生态化学
6楼2016-12-28 20:10:42