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winter121

木虫 (小有名气)

[求助] 实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常,求助解决已有2人参与

目前的情况是用的仪器ABI 7500 FAST,SYBR做相对定量。做了几板实验,都是目的基因挺好,内参不好。内参基因还有目的基因的引物都是文献中找的。引物合成公司建议降低退火温度跑胶试试,结果,PCR跑胶后一个基因也跑不出来,但是实时荧光定量PCR最起码目的基因的峰很好啊。求大神帮忙分析下原因在哪里。溶解曲线图见附件。

实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常,求助解决
内参0-1.png


实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常,求助解决-1
1内参的溶解曲线.png


实时荧光定量-相对定量中内参基因的峰不大正常,求助解决-2
内参基因1.png
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p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主可以把引物BLAST一下,看看引物特异性如何,另外可以适当减少引物加入量,提高退火温度,多方面考虑一下
5楼2016-12-28 14:04:41
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