应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化问题
51/1返回列表
查看: 1546  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

307无尘

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化问题 已有2人参与

最近在做蛋白纯化问题，一直纯化不出来，主要是目的蛋白都挂不上镊柱！需要说明的是，我是用AKTA仪器纯化的，镊柱是重新再生过的，别人一起纯化，他都可以纯化出来。
        刚开始用PH7.4的A（20mM咪唑）,B（500mM咪唑）液进行纯化，结果目的蛋白都没有挂上镊柱，后来换成PH8.0的A（不含咪唑），B（500mM咪唑）液还是挂不上镊柱，这倒是是怎么回事呀？求各位大神支招！不胜感激！！！
        PS:我的蛋白是真核蛋白，分子量17KDa，用28a载体在BL21DE3中进行可溶性表达，然后再去纯化

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-12-25 23:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

307无尘

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-26 16:47:54
可能是你的标签被包裹，不能发挥作用。

我有拿去做Western Blot过，能够显示出我的目的条带，那应该就是没有被包裹住的可能吧？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-12-27 13:24:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你的标签被包裹，不能发挥作用。
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-26 16:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hienzyme

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-12-27 07:25:12
如果你的蛋白挂柱弱，不带咪唑时，背景蛋白更多结合在Ni柱上，可用的位点更少。
建议你可以改变His-tag融合的位置，如N端改C端，用pET21a,或者设计引物时带8个his甚至10个。
如果蛋白表达没问题，也可以根据等电点选择合适的离子柱纯化方案。
赞一下(1人) 回复此楼
海恩泽生物科技
3楼2016-12-27 01:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 307无尘 at 2016-12-27 13:24:50
我有拿去做Western Blot过，能够显示出我的目的条带，那应该就是没有被包裹住的可能吧？
...

WB的样品是变性蛋白
赞一下 回复此楼
5楼2016-12-28 09:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +13 羊腰板 2026-08-21 13/650 2026-08-23 09:25 by lfy8008
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭