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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

[求助] 双酶切问题 已有2人参与

我的质粒是12000多bp,双酶切以后，大片段仍然是12000多，小片段只有几十个碱基，那我用质粒作阴性对照，怎么质粒和酶切后的大片段仍然在一条线上？？？求各位大神解答！！！
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默默搜寻
1楼 2016-12-25 12:11:07
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你在你的目的片段后面在加个质粒上没有的酶切位点，让这个酶切位点位于终止子后面。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2016-12-26 10:05:26
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
你的质粒可能时间放久了，由超螺旋变成开环，开环的和线性的在12k估计很难分开

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Comeon！
3楼2016-12-26 12:09:20
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切之后总共就差几十个bp，怎么可能看得出来，你质粒这么大，就算差上一两百也看不出来的

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···
4楼2016-12-26 14:35:09
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-12-26 10:05:26
你在你的目的片段后面在加个质粒上没有的酶切位点，让这个酶切位点位于终止子后面。

谢谢你，那你给我解释一下这样做的原因好吗？
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默默搜寻
5楼2016-12-27 11:43:15
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-12-26 14:35:09
酶切之后总共就差几十个bp，怎么可能看得出来，你质粒这么大，就算差上一两百也看不出来的

谢谢你，那这样的结果我用胶回收是不是有点困难，我胶回收的浓度咋那么低啊？？都不上10
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默默搜寻
6楼2016-12-27 11:44:33
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by MIDNA at 2016-12-27 11:44:33
谢谢你，那这样的结果我用胶回收是不是有点困难，我胶回收的浓度咋那么低啊？？都不上10...

质粒那么大，回收浓度只有不上10？太低了吧，最好重新切一下吧~多切几管
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···
7楼2016-12-27 12:10:15
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chenjunpku

新虫 (初入文坛)
就几十bp的片段这么费劲干嘛？直接合成得了

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8楼2017-01-02 00:28:43
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lining0624

新虫 (初入文坛)
切1ug，看看纯化效率如何

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9楼2017-01-02 09:51:44
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