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MIDNA

铁虫 (小有名气)

[求助] 双酶切问题 已有2人参与

我的质粒是12000多bp,双酶切以后,大片段仍然是12000多,小片段只有几十个碱基,那我用质粒作阴性对照,怎么质粒和酶切后的大片段仍然在一条线上???求各位大神解答!!!
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你在你的目的片段后面在加个质粒上没有的酶切位点,让这个酶切位点位于终止子后面。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2016-12-26 10:05:26
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)

你的质粒可能时间放久了,由超螺旋变成开环,开环的和线性的在12k估计很难分开

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Comeon!
3楼2016-12-26 12:09:20
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切之后总共就差几十个bp,怎么可能看得出来,你质粒这么大,就算差上一两百也看不出来的

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···
4楼2016-12-26 14:35:09
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-12-26 10:05:26
你在你的目的片段后面在加个质粒上没有的酶切位点,让这个酶切位点位于终止子后面。

谢谢你,那你给我解释一下这样做的原因好吗?
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5楼2016-12-27 11:43:15
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-12-26 14:35:09
酶切之后总共就差几十个bp,怎么可能看得出来,你质粒这么大,就算差上一两百也看不出来的

谢谢你,那这样的结果我用胶回收是不是有点困难,我胶回收的浓度咋那么低啊??都不上10
默默搜寻
6楼2016-12-27 11:44:33
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by MIDNA at 2016-12-27 11:44:33
谢谢你,那这样的结果我用胶回收是不是有点困难,我胶回收的浓度咋那么低啊??都不上10...

质粒那么大,回收浓度只有不上10?太低了吧,最好重新切一下吧~多切几管
···
7楼2016-12-27 12:10:15
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chenjunpku

新虫 (初入文坛)

就几十bp的片段这么费劲干嘛?直接合成得了

发自小木虫Android客户端
8楼2017-01-02 00:28:43
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lining0624

新虫 (初入文坛)

切1ug,看看纯化效率如何

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-01-02 09:51:44
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