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构建质粒 已有1人参与
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刚开始做RT-PCR，怎样构建功能基因的标线质粒呢？周围的人都是做一次用好长时间，自己也没看过别人怎样弄。求高人说一下主要步骤或者推荐一下资料。 |
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peitaokong
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
lzhd655: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2016-12-25 16:22:10
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lzhd655: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2016-12-25 16:22:10
| 应该是绝对定量吧。先设计定量的引物探针。第一步，目的基因扩增，用不含探针的一对引物扩增。第二步,扩增的pcr产物跑胶，条带大小正确的话，回收胶。第三步，TA克隆，连接转化。第四步，测序，要求质粒菌液返还。第五步，序列比对 第六步，测序正确的话，返还的质粒测定浓度，根据公式算出拷贝数。第七步，构建标准品，质粒按照拷贝数稀释，一般从十的七次方到十的零次方，这一步一定要精确。第八步，定量PCR上机实验。希望能够帮助你。 |
2楼2016-12-22 19:16:25