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yishinianhua

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么我的超滤离心管不浓缩

如题,我买的Milipore的Amicon-Ultra 15 分子量是10KDa的,将菌液上清加入超滤离心管有膜的那个小管,然后放到离心机里面3000g 离心了20分钟,但是拿出来的时候没有任何变化,完全没有浓缩。不知道是怎么回事?

为什么我的超滤离心管不浓缩
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sss2172014

木虫 (小有名气)

上清杂质太多了,完全就是堵掉了,滤膜完全堵死。这个玩意儿是浓缩蛋白用的。你想想,你菌液上清中得有多少远远大于15KD的东西,甚至肉眼不见的颗粒。你试试0.22的滤膜过滤一下,一样堵死。

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2楼2016-12-20 01:47:18
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sss2172014 at 2016-12-20 01:47:18
上清杂质太多了,完全就是堵掉了,滤膜完全堵死。这个玩意儿是浓缩蛋白用的。你想想,你菌液上清中得有多少远远大于15KD的东西,甚至肉眼不见的颗粒。你试试0.22的滤膜过滤一下,一样堵死。
...

我已经用滤膜过滤一遍了,而且里面只加水都过滤不下来。

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3楼2016-12-20 08:40:05
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sss2172014

木虫 (小有名气)

全新的,滤水都不行?再管一个试试?也不行的话那这批管子有问题啊

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4楼2016-12-20 08:57:19
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唯沐叶之夏

新虫 (正式写手)

你转速太低了吧?我们10KDa用的都是一万二的转速

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5楼2016-12-20 09:19:50
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sss2172014 at 2016-12-20 08:57:19
全新的,滤水都不行?再管一个试试?也不行的话那这批管子有问题啊

买回来全新的要怎么处理,我就用纯水泡着放四度冰箱

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6楼2016-12-20 09:31:59
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muchong5577

金虫 (正式写手)

同意5楼的说法,建议提高转速。菌液上清直接过超滤管不好吧,一般我们是得到纯化的蛋白,想甩掉多余的水分,同时也除去一些分子量不同的蛋白才使用。
7楼2016-12-20 09:34:37
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by muchong5577 at 2016-12-20 09:34:37
同意5楼的说法,建议提高转速。菌液上清直接过超滤管不好吧,一般我们是得到纯化的蛋白,想甩掉多余的水分,同时也除去一些分子量不同的蛋白才使用。

目前我们还不清楚目的蛋白的分子量,就是想通过超滤离心管把不同分子量的物质大致分开、检测它们的作用,进而找到目的蛋白。各位大神有什么好方法吗,求指教!
8楼2016-12-20 10:42:15
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

离心速度太小了,而且可能你管子有问题,这种管经常会出问题的

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9楼2016-12-20 11:18:39
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艾琦+you

新虫 (初入文坛)

上清液应该预处理一下吧,不然容易堵住

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10楼2017-07-13 09:55:19
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