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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 将超氧化物歧化酶（SOD）基因导入另一个菌种表达问题
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ninxia1

禁虫 (著名写手)
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1楼 2016-12-15 12:21:20
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jmzLdmx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ninxia1: 金币+10, ★有帮助, 谢谢 2016-12-29 00:20:29
这个首先在Gene Bank上找到你这个菌SOD的序列，然后再找到这个菌的全基因组序列，根据目的片段序列设计引物，然后再用PCR进行扩增目的片段，然后导入载体转化进入工程菌进行诱导表达，SDS-PAGE进行检测，你完全不用考虑内含子的情况，如果表达以后构象不对你才需要考虑进行RT-PCR。你可以用试剂盒提取总RNA，Trizol试剂盒就行，然后按照RT-PCR步骤做就行。最后再进行检测。
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5楼2016-12-28 18:45:33
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
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2楼2016-12-15 12:34:12
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蓝索道人

木虫 (正式写手)
两种方法都可以，如果你选的物种的SOD基因分段不是很多长度也都不是很短，比如两段，分别PCR再连接就可以了，如果分段比较多，那还是提RNA吧

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努力就有收获！
3楼2016-12-15 18:08:45
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ken19860823

木虫 (正式写手)
克隆sod1的cdna到该菌种的表达载体，然后导入。rna一是只能瞬时表达，另外还可能被免疫掉。单细胞的过表达很成熟的，真核原核都可以买到克隆和穿梭载体。病毒的基因组有rna的，恕我愚钝没见过细胞生物是rna遗传的

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做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-12-16 16:39:45
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